To neizmanto virspusējo mikozes diagnostikā. Mikožu mikrobioloģiskā diagnostika mikroskopiskā izmeklēšana

mikroskopija -šī ir viena no galvenajām metodēm mikozes laboratoriskajā diagnostikā. Šis pētījums ir jāveic no dienas, kad barības barotnē parādās pirmās kolonijas. Pirms mikroskopiskās izmeklēšanas ir jāzina, vai sēne ir raugs vai pelējums - pēc koloniju izskata, stādu pārbaudes rezultātiem.

Mikroskopējot pelējuma sēnītes, tiek ņemta vērā micēlija struktūra (t. i., hifu struktūras iezīmes, to krāsa, starpsienas; konidiju un sporu struktūras iezīmes, tostarp konidiju izmērs, forma, krāsa; to šūnu sienas struktūra , starpsiena utt.)

Sagatavots mikroskopijai dzimtā Un krāsotas narkotikas. Ēdienu gatavošanai krāsotas preparāti, materiāls tiek apstrādāts dažādos veidos:

1. KrāsošanaPAS- metode. PAS metodes izmantošana ļauj noteikt neitrālos polisaharīdus mikroorganismu sieniņās. Neitrālie polisaharīdi ir glikāna-mannāna komplekss, kas atrodas vairuma eumicītu šūnu sieniņās, kā rezultātā notiek iekrāsošanās.

PAS- reakcijas- viena no sēnīšu infekcijas audu formu mikroskopiskās diagnostikas metodēm. Mikroskopiskās diagnostikas praktiskajās laboratorijās tiek izmantotas dažādas šīs metodes modifikācijas: hromskābes oksidēšana - Bauera reakcija; Gridley traips.

2. Grama krāsojums (Grama-Veigerta modifikācija), lai identificētu saistītos mikroorganismus.

3. Ziehl-Nielson krāsojums skābju izturīgu organismu noteikšanai. Ja pētāmais materiāls šķidrums, tad no tā tiek sagatavota nekrāsota uztriepe mikroskopijai dzidrināšanas šķidrumos: spirta un glicerīna maisījums attiecībā 1:1.

Nākamais solis ir mikoloģiskā izpēte.– sēņu izolēšana un identificēšana. Apsveriet šī posma iezīmes atkarībā no pētāmā materiāla.

Mikoloģiskā izpēte

Kultūras pētījumi. Kultūras pētījumi ir balstīti uz patogēna izolēšanu no testa materiāla. Audzēšanas termiņi dažādiem sēņu veidiem ir atšķirīgi (no 2-4 dienām līdz 4 nedēļām), ja ir aizdomas par dimorfām sēnēm, kultūru izolē līdz 8 nedēļām. Galvenās barotnes audzēšanai mikoloģiskā laboratorijā ir Sabouraud barotne: Sabouraud dekstrozes agars (blīvs barotne), Sabouraud buljons (šķidra barotne). Lai nomāktu baktēriju floras augšanu, Sabouraud barotnei pievieno antibiotikas (hloramfenikolu, gentamicīnu, retāk streptomicīnu, penicilīnu). Lai nomāktu saprofītu sēnīšu augšanu, barotnei pievieno cikloheksimīdu un hloramfenikolu. Ir gatavi barotnes ar cikloheksimīdu ( Mikobiotika Mycosel).

Optimālais audzēšanas režīms lielākajai daļai patogēno sēņu ir 30 0 C, 20-25 0 C, retāk 37 0 C - ja ir aizdomas par dimorfām sēnēm. Inkubācijas ilgums lielākajai daļai sēņu ir līdz 6 nedēļām; ja pēc šī laika nav novērojama izaugsme, tad sniedziet noraidošu atbildi. Ja ir aizdomas par dimorfisku mikozi, ja 6 nedēļu laikā nav augšanas, kultūru glabā 8 nedēļas un tikai pēc tam dod negatīvu rezultātu.

Kultūras pētījumā diagnostiski nozīmīga ir:

Pelējuma vai rauga sēnītes izolēšana, pārbaudot parasti sterilu materiālu;

Dimorfas sēnītes izolēšana.

Mikoloģiskās izpētes algoritms

1. Patogēna sēnīšu etioloģijas noteikšana (mikroskopija).

2. Nosakiet rauga sēnīti vai pelējumu:

Klīniskā materiāla mikroskopija (micēlija klātbūtne);

Koloniju raksturs uz barotnes, augšanas ātrums (rauga sēnītes aug 48 stundas, pelējuma sēnes aug lēni).

3. Sēnes galīgo identifikāciju sugas līmenī (intraspecific) veic, izmantojot bioķīmiskos testus un imunoloģiskās metodes. Bioķīmisko īpašību izpētē tiek pētīta izolētās kultūras asimilācijas (auksanogramma) un fermentācijas (zigogramma) spēja. Ir iespējams izmantot automatizētas identifikācijas sistēmas (testu sistēmas sēņu identificēšanai).

Oportūnistisko sēņu izolācijas etioloģiskās nozīmes kritēriji

1. Ja vietējā preparātā (saprofītiskā veģetācijā) ir redzamas tikai blastosporas, tad to uzskata par nesēju.

3. Ja blastosporas ir atsevišķas un dominē pseidomicēlija, tad tas liecina par dziļu orgānu bojājumu.

4. Aktīva blastosporu veidošanās liecina par akūtu procesu.

5.Rezultātu kvantitatīvais novērtējums - sēnītes izolēšana no atšķaidījumiem

10 - fekālijas, urīns;

10 - krēpas.

6. Viena un tā paša veida sēnīšu atkārtota sēšana

7. Antivielu klātbūtne pret izolēto celmu.

Izdalījumu no gļotādas mikoloģiskā izmeklēšana

1. Materiāla sagatavošana. Pēc materiāla noņemšanas no gļotādām tamponu ievieto 2 ml Sabouraud šķidrās barotnes vai misas agara, vai BCH, ielej sterilās mēģenēs. Tos rūpīgi sakrata 5 minūtes, cenšoties nemērcēt korķi. No iegūtās suspensijas gatavo vairākus atšķaidījumus 1:10 un 1:100 utt.

No katra atšķaidījuma inokulē 0,1 ml uz 2 glāzēm misas agara, Sabouraud agara vai MPA. Inokulācijas uz cietas barotnes un mēģenes ar šķidru barotni ar tamponu bagātināšanai inkubē +37 0 С 48 stundas:

Pēc tam, kad pagājis laiks, sējumus apskata un saskaita koloniju skaitu un aptuveni nosaka rauga koloniju skaitu. To skaitu reizina ar 20 un ar atšķaidījumu, no kura tiek veikta sēšana;

Ja plāksnēs ar inokulāciju, kas izgatavota no atšķaidījumiem, nav augšanas, tad atkārtotu inokulāciju veic no bagātināšanas vides uz plāksni ar misas agaru.

Asins mikoloģiskā izmeklēšana

1. Materiāla sagatavošana. Pēc asins paraugu ņemšanas to atšķaida attiecībā 1:10, lai asins baktericīdās īpašības neaizkavētu sēnīšu augšanu.

2. Kultūras studijas.

5-10 ml asiņu inokulē 50-100 ml Sabouraud šķidrā barotnē ar 2% glikozi. 37 0 C temperatūrā tos inkubē nedēļu;

Pēc 5 dienām veiciet kontroles sēšanu. Lai to izdarītu, nogulsnes ņem ar sterilu pipeti;

Sēklu krūzes tiek turētas termostatā 37 0 C temperatūrā 2-5 dienas;

Ja tiek konstatēta augšana, tiek sniegta provizoriska atbilde par fungēmiju, un pētījuma laikā tiek veikta turpmāka sēnītes identificēšana.

Biopsijas paraugu mikoloģiskā izmeklēšana

1. Materiāla ņemšanai tiek izmantota nospiedumu metode.

2. Kultūras studijas:

Ar pētāmo audu gabalu tiek izveidots nospiedums uz blīvas Sabouraud barotnes virsmas;

To pašu audu gabalu ievieto 50 ml šķidrā barotnē (misa vai Sabouraud);

Kultūraugus inkubē 37 0 C temperatūrā 5 dienas.

Pirmā uzņemšana

Laboratorijas diagnostika

Visefektīvākās ādas mikozes diagnostikas metodes ir dažādi laboratorijas testi, kas var identificēt patogēnu un palīdzēt izvēlēties terapijas shēmu. Lai identificētu mikozes izraisītāju, tiek noteikti šādi laboratorijas testi:

• histoloģiskā analīze;
• bakterioloģiskā kultūra;
• imunoloģiskie pētījumi;
• PCR diagnostika;
• kultūras ekspertīze;
• mikrobioloģiskie pētījumi.

Mikrobioloģiskā diagnostika ir visizplatītākā un vienkāršākā metode mikozes noteikšanai asinīs un uz ādas. Lai noteiktu precīzu diagnozi, jums vajadzētu zināt, kā pareizi savākt materiālu, kas nepieciešams pētījumā. Skartie mati jāsavāc ar pinceti. Ja āda ir inficēta, tad mikroskopijai āda jānokasa no bojātās vietas. Visu paņemto materiālu ievieto 30% kālija hidroksīda šķīdumā un pēc tam uz stikla priekšmetstikliņa. Mikrobioloģiskā diagnostika spēj precīzi noteikt sēnītes atrašanās vietu (mata, ādas iekšpusē vai ārpusē) un tās lielumu.

Lai novērstu kļūdainu mikozes diagnozi, ir nepieciešams pareizi un kompetenti ņemt materiālu mikrobioloģiskai izmeklēšanai.

Medicīnā ir šādas mikrobioloģiskās diagnostikas metodes:

• Mikroskopija, izmantojot vietējos vai nekrāsotus preparātus. Lai to izdarītu, materiāls tiek dzidrināts ar 10-30% kālija vai nātrija hidroksīda šķīdumiem. Pēc tam apstrādāto materiālu novieto uz laboratorijas stikla, kur iepriekš tika iepilināts nedaudz glicerīna. Augšējo pārklāj ar stikla plāksni un veic analīzi.
• Krāsotu preparātu mikroskopija tiek veikta vairākos veidos, kas identificē baktērijas, atšķir dažādas baktērijas un identificē dažādas sēnītes.

Bakterioloģiskā kultūra

Bakterioloģiskā kultūra ir viena no visvairāk efektīvas metodes diagnostikai.

Bakterioloģiskās sēšanas savākšana uz barotnes ir precīzs veids, kā diagnosticēt mikozi. Ņemot vērā izskats un audzētās sēnītes kolonijas īpašības, dermatologs nosaka patogēna veidu, kas izraisīja mikozi. Vienīgais aptaujas trūkums ir tas, ka kolonijas audzēšana prasa ilgu laiku. Vidēji ir nepieciešamas aptuveni 3 nedēļas, lai noskaidrotu patogēna celmu. Dažos gadījumos metode nesniedz gaidītos rezultātus.

PCR diagnostika

PCR diagnostikas metode ietver mikozes izraisītāja identificēšanu, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju. Pārbaudes laikā palielinās hibridizācijas jutība, kas palielina vīrusa DNS saturu testa materiālā. Šī izmeklēšanas metode ir jauna un prasa no pacienta vairākas pārbaudes. Tiek uzskatīts, ka šāda veida diagnostika ir diezgan dārga, bet dod precīzus rezultātus.

Kultūras eksāmens

Diagnozes pēdējā stadijā ir ieteicami kultūras diagnostikas pasākumi. Metode sastāv no sēnīšu kultūras iegūšanas, kas pēc tam tiek nosūtīta pārbaudei, izmantojot mikroskopu. Iegūtais materiāls tiek novietots uz mākslīgi izveidotas uzturvielu barotnes un tiek noteikts patogēna veids, izskats, izmērs. Pēc tam tiek parādīta īpaša ārstēšana, kuras mērķis ir apkarot noteikta veida mikozes izraisītāju.

Pēc zinātnieku domām, 70% pasaules iedzīvotāju ir pēdas sēnītes simptomi. Ar šo slimību cieš starppirkstu krokas un āda uz zolēm. Slimības cēlonis ir sēne, kas sākotnēji tika konstatēta tikai ierobežotos Dienvidaustrumāzijas un Āfrikas apgabalos. Pirmkārt Pasaules karš, izraisot iedzīvotāju masveida migrāciju un sanitāro apstākļu pasliktināšanos, izraisīja slimības izplatīšanos visā pasaulē.

Kas izraisa pēdu sēnīti

Galvenais slimības izraisītājs ir Trichophyton rubrum. T. mentagrophytes un Epidermophyton floccosum var izraisīt bojājumus. Daudz retāk Candida ģints sēnes un pelējuma mikroorganismi var kļūt par patogēniem mikrobiem.

Nozīmīgākie slimības riska faktori:

• cukura diabēts;
• imūndeficīta stāvoklis (AIDS);
• plakanas pēdas;
• perifēro artēriju ateroskleroze;
• apakšējo ekstremitāšu varikozas vēnas.

Ārējie apstākļi, kas veicina infekcijas attīstību:

• slēgti nehigroskopiski apavi;
• pēdu traumas (varžacis, nobrāzumi);
• sports.

Pēdas sēnītes simptomi visbiežāk sastopami pieaugušiem vīriešiem. Bērni slimo reti.

Pēdas sēnītes simptomi

Attīstoties slimībai, ādas lobīšanās un sausums, nieze un dedzināšana, īpaši starppirkstu telpās, parādās sāpīgas plaisas zem pirkstiem. Dažreiz pirmie pēdas mikozes simptomi ir burbuļi, kas pārsprāgst, veidojot erozijas. Bieži slimība norit izdzēstā veidā, izpaužoties tikai kā viegls lobīšanās, kas atgādina miltus, pirkstu krokās.

Ir 4 slimības klīniskās formas.

Visizplatītākais ir starppirkstu jeb intertriginous variants. Āda starp pirkstiem kļūst sarkana, plaisā, virsmas slānis kļūst mitrs un pārslains. Šīs zīmes sniedzas līdz zolei, ir pievienotas stiprs nieze un dedzināšana. Bieži vien saistīta ar bakteriālu iekaisumu.

Plakans-hiperkeratotiskais variants ir saistīts ar izteiktu ādas sabiezēšanu un plaisāšanu. Zole ir sarkana un pārslaina. Papēža zonā parādās dziļas sāpīgas plaisas, nieze parasti nav raksturīga. Bieži vien tas ir divpusējs bojājums, to sauc arī par "mokasīna pēdu".

Dishidrotisko variantu papildina vairāku mazu, niezošu sāpīgu pūslīšu parādīšanās. Tie saplūst viens ar otru, veidojot lielus burbuļus. Pūsliņu vāki plīst, atsedzot spīdīgu, viegli ievainojamu, sāpīgu virsmu – eroziju. Ārējās izpausmes atgādina ekzēmu.

Bieži vien mikrobu iekaisums pievienojas cirkšņa limfmezglu palielināšanās, drudzis, sāpes kājās, slikta dūša, galvassāpes un citas intoksikācijas pazīmes. Ar disidrotisko formu bieži rodas alerģija pret sēnītēm - mikotiskā ekzēma. To pavada izsitumi uz ķermeņa vietām, kas nav inficētas ar sēnīti, piemēram, uz rokām.

Izdzēstā versija parasti notiek nemanāmi. To pavada neliela ādas lobīšanās starp īkšķi un rādītājpirkstu un/vai gredzenu un mazajiem pirkstiņiem uz kājas. Niezes nav.

Pēdas sēnītes pazīmes

Dažādi pēdu mikozes veidi var būt neatkarīgas slimības vai rasties kā daļa no vispārējas ķermeņa sēnīšu infekcijas. Dažreiz ar šo orgānu iesaistīšanos parādās zīme "divas kājas - viena roka". Var pievienoties onihikomozei - nagu sēnīšu iznīcināšanai. Dažreiz vienlaikus cieš cirkšņa krokas.

Galvenie pēdas mikozes simptomi un ārstēšana ir parādīti fotoattēlā:

ādas lobīšanās

Ādas sausums un plaisāšana

Burbuļi un erozija

Diagnostika

Pieredzējis dermatologs jau pirmajā apskatē var atpazīt dažādus pēdu mikozes veidus. Tomēr, lai apstiprinātu diagnozi, ir nepieciešama mikroskopiskā izmeklēšana. Tam izmanto zvīņas no bojājuma, nokasa ar lāpstiņu un apstrādā ar sārma šķīdumu. Iegūtais materiāls tiek pārbaudīts mikroskopā un tiek atklāti patogēni.

Tiešā mikroskopija ir ātra, lēta un viegli izpildāma, taču nenosaka, kāda veida sēnīte ir izraisījusi slimību. Tāpēc materiāls tiek sēts uz barības vielu barotnes, kam seko iegūtā materiāla kultūras izpēte. Taču iegūt sēnītes kultūru pēc tās noteikšanas mikroskopā iespējams tikai 20–6% gadījumu.

Kāju mikozes ārstēšanas veidi

Zāles sēnīšu slimību ārstēšanai jānosaka dermatologam. Parasti pēdas mikozes ārstēšanu veic ar ārēju līdzekļu palīdzību.

Viens no efektīvas zālesšajā slimībā - klotrimazols. Mūsu veikalā to var iegādāties par zemu cenu. Medicīna losjona veidā Klotrimazols nagiem un ādai kavē sēnīšu vairošanos epitēlija stratum corneum biezumā. Ja tiek skartas starppirkstu krokas, losjonu katru dienu uzklāj uz tīras, sausas pēdu ādas nedēļu, ja nepieciešams, ilgāk.

Ar smagu ādas keratinizāciju un plaisāšanu vispirms ir nepieciešams likvidēt atmirušās ādas nogulsnes. Tam nepieciešams lietot pīlinga zāles. Piemēram, izrakstiet salicilskābes ziedi, krēmus ar pienskābi vai urīnvielu. Pēc ragveida nogulšņu noņemšanas losjonu uzklāj 1-2 reizes dienā.

Ar disidrotisko variantu pirmajā posmā ir jāsamazina raudāšana. Šim nolūkam tiek izmantoti losjoni ar tanīnu vai borskābi. Smagos gadījumos ārstēšanai tiek pievienoti glikokortikoīdu līdzekļi. Pēc tam uzklājiet Clotrimazole losjonu parastajā veidā.

Ar dzēstu formu pēdas apstrādā ar losjonu vienu reizi dienā 7 līdz 10 dienas, bet kursa ilgums ir individuāls un to nosaka ārsts.

Sistēmiskā terapija

Ilgstošas ​​vai recidivējošas pēdas sēnītes gadījumā jums var būt nepieciešams lietot pretsēnīšu zāles iekšķīgi. No kuņģa-zarnu trakta tie nonāk asinsritē un pēc tam ādā, kur iznīcina sēnītes. Tiek izmantotas trīs galvenās zāles:

• flukonazols;
• itrakonazols;
• terbinafīns.

Šo līdzekļu uzņemšanas ilgums ir vismaz mēnesis. Viņu cena ir diezgan augsta. Tāpēc pēdas mikozes profilakse vienmēr ir vieglāka un izdevīgāka nekā tās ārstēšana.

Sistēmiskās zāles īpaši bieži tiek izrakstītas, ja sēnīte ir skārusi ne tikai ādu, bet arī nagus. Šajā gadījumā zāles uzkrājas nagu plāksnes augošajā daļā, un pamazām aug veselīgs nags. Lai uzlabotu efektu, nagu var pilnībā noņemt ķirurģiski, pēc tam to atjauno bez sēnītes.

Nagu noņemšanas, sistēmiskas un lokālas pretsēnīšu terapijas kombinācija īpaši bieži ir nepieciešama gados vecākiem pacientiem. Šai pacientu grupai nagi nereti aug lēni, tiek traucēta asinsrite pēdās, tāpēc efekta sasniegšanai nepieciešama liela zāļu deva un ilgs ārstēšanas kurss.

Ārstēšana ar tautas līdzekļiem

Tikai recepšu pielietošana tradicionālā medicīna nepalīdzēs atbrīvoties no sēnītes. Tomēr šis papildinājums parastajai terapijai saīsina ārstēšanas kursu un paātrina atveseļošanos.

Ir lietderīgi katru vakaru 10 minūtes veikt siltas kāju vannas, pēc tam rūpīgi noslaucīt pēdas ar dvieli, īpaši starp pirkstiem, un uzklāt ārstniecisko losjonu Clotrimazole nagiem un ādai. Noderīgas vannas sastāvdaļas, kas mazina iekaisumu un mazina niezi:

• strutene un asinszāle;
• diždadža saknes;
• vērmeles zāle;
• eikalipta lapas;
• egļu skujas;
• svaigi biezumi no pagatavotas maltas kafijas;
• sāls;
• rīvētu maisījumu veļas ziepes, cepamā soda, kālija permanganāts un sinepju pulveris.

Skartās vietas var ieziest ar bērza darvu vai pašgatavotu ziedi no 100 gramiem sviesta, kas sajaukts ar saspiestu ķiploka galvu. Noder arī propoliss, ko var pārsiet pie sāpošiem nagiem.

Ir lietderīgi izgatavot kompreses no dabīgiem līdzekļiem. Pirmkārt, tos atstāj uz 1 - 2 stundām un ar labu toleranci - uz nakti. Tiek izmantotas šādas sastāvdaļas:

• ķirbju mīkstums;
• sasmalcinātas melno redīsu sēklas;
• piparmētra, malta ar sāli;
• diždadža vai pīlādžu lapas, nedaudz mīkstinātas ar rullīti.

Skarto zonu eļļošana ar dažu augu sulām un citiem dabīgiem līdzekļiem ir efektīva:

• propolisa spirta šķīdums;
• sīpolu vai ķiploku sula;
• strutene sula;
• tējas koka eļļa.

Slimību profilakse

Lai izvairītos no mikozes vai novērstu tās atkārtošanos, ir nepieciešama vienkārša, bet pastāvīga profilakse:

• vasarā valkāt elpojošus apavus no dabīga materiāla;
• apmeklējot peldbaseinus, pirtis, publiskās dušas, valkāt individuālas gumijas čības;
• nevalkājiet svešas kurpes, piemēram, ballītē;
• izmantojiet tikai savas higiēnas ierīces - šķēres, pumeku, nagu vīli.

Lai izvairītos no atkārtotas inficēšanās, zolītes un apavu iekšējā virsma regulāri jāapstrādā ar dezinfekcijas līdzekļiem. Zināms tautas recepte- etiķa esences šķīdums, bet tam ir asa nepatīkama smaka.

Ārsti iesaka lietot Mycospray, kam ir ne tikai pretsēnīšu, bet arī antibakteriāla iedarbība. Mycospray lieliski noder ne tikai apavu apstrādei, bet arī uzklāšanai uz pēdām pirms sabiedrisko vietu apmeklējuma, lai aizsargātu pēdas.

Maskavas un reģionu iedzīvotāji mūsu interneta veikalā var iegādāties zāles pēdas sēnītes ārstēšanai un profilaksei. Ir pierādīts, ka tie ir efektīvi un droši. To lietošana ir ieteicama visiem cilvēkiem, kuri nevēlas inficēties ar kāju sēnīti vai ātri atbrīvoties no tās.

2. Patoloģiskā materiāla laboratoriskā izmeklēšana

2.1. Mikroskopiskie pētījumi

Lai atklātu sēnītes morfoloģiskos elementus - rauga šūnas, pseidomicēliju, micēliju, konidioforus, konidijas, dziļo mikožu audu formas - patoloģiskais materiāls tiek izmeklēts native un krāsotos preparātos.

Šķidru patoloģisko materiālu izmeklē nekrāsotā stāvoklī šādos dzidrināšanas šķidrumos: spirta un glicerīna maisījums (etilspirts 1 daļa, glicerīns 2 daļas, destilēts ūdens 2 daļas), Lugola šķīdums (1 g kristāliskā joda, 2 g kālija jodīds, 150 ml ūdens), kā arī ūdenī vai fizioloģiskā šķīdumā. Dabisko preparātu pagatavošanai uz stikla priekšmetstikliņa ar cilpu vai pipeti uzliek materiāla pilienu, pēc tam 1-2 pilienus apgaismojoša šķidruma, pārklāj ar vāku un mikroskopē ar mazu palielinājumu 1:80 (okulārs 10x un objektīvs 8x), pie kurām var redzēt rauga šūnu kopas, pseidomicēliju, micēliju un citus sēņu elementus. Ar lielu palielinājumu 1:400 var raksturot atsevišķas šūnas.

Blīvu patoloģisku materiālu (ādu, nagu zvīņas) ievieto 10-20% KOH šķīduma pilē, nedaudz uzsilda virs degļa liesmas (labākai macerācijai), līdz piles perifērijā parādās sārmu kristāli. Tad pilienu pārklāj ar vāku, nedaudz uzspiež uz tā un mikroskopē, vispirms zemā palielinājumā, lai atrastu pārslu, pēc tam ar lielu palielinājumu.

Matu materiālā, sporu apvalkā, kas aptver matus (ektotrikss) vai matā (endotrix), sēnīšu elementi parasti ir ļoti skaidri redzami. Matu bojājumi, piemēram, sporu izmēri, ir specifiski dažāda veida dermatofīti. Nepieciešama diferenciāldiagnoze starp sēnīšu struktūrām un artefaktiem. Iespējamie viltus pozitīvu rezultātu avoti ir lipīdu pilieni, gaisa burbuļi, tekstilšķiedras un tā sauktā “mozaīkas sēne”. Lipīdu pilieni var izskatīties kā rauga šūnas, un šādi atradumi visbiežāk sastopami slikti dzidrinātā materiālā. Tekstilšķiedras parasti atrodas atsevišķi no epidermas, matu vai nagu materiāla. Tās ir lielākas par sēnītes hifām, ir nevienmērīga biezuma un nesatur starpsienas. “Mozaīkas sēne” ir artefakts, kas iegūts KOH kristalizācijas procesā, pārmērīgi karsējot preparātus. Atšķirībā no sēnītēm skaidras šūnu dalīšanās nav noteiktas.

Svarīgs solis sēnīšu infekciju diagnostikā ir krāsotu preparātu sagatavošana. Jebkurš patoloģisks materiāls (uztriepes, orgānu nospiedumi, centrifūgas un, protams, histoloģiskie griezumi) jāveic trīs galvenajos apstrādes veidos: 1) krāsošana ar PAS metodi, lai identificētu īstās sēnes - eumycetes; 2) krāsošana pēc Grama metodes vai modifikācijās pēc Grama-Veigerta, pēc Bogoļepova, pēc Brauna-Brennas - identificēt saistīto baktēriju mikrobiotu, noteikt aktinomicītus un nokardiju; 3) krāsošana pēc Zīla-Nīlsona metodes vai modifikācija pēc Kignona metodes - skābēm izturīgu mikroorganismu noteikšanai, galvenokārt indikācijai un diferenciācijai ar Mycobacterium tuberculosis, spitālības, nokardijas un sporu veidošanās izraisītāju noteikšanai. raugi.

PAS metode (Šifa jodskābe) ietver neitrālu polisaharīdu noteikšanu mikroorganismu sieniņās. Lielākajai daļai eumicītu sieniņās ir glikāna-mannāna komplekss dažādās koncentrācijās, kā rezultātā rodas iekrāsošanās.

Prokarioti (baktērijas) izrādās PAS negatīvi, tostarp aktinomicīti un nokardijas, kas interesē mikologu. Taču aktinomikotiskā drūzēna veidošanās laikā veidojas tā sauktais “cements”, kas veģetatīvo aktinomikotisko micēliju salīmē granulā, kas arī piešķir PAS pozitīvu krāsu. Šajā sakarā šī metode ir piemērojama arī aktinomikozes diagnostikā.

PAS reakcija (un tās modifikācija) ir vissvarīgākā metode sēnīšu infekcijas audu formu diagnosticēšanai. Metodes pamatā ir ogļhidrātu glikolu grupu oksidēšana ar jodskābi vai hromskābi. Jodskābe oksidē 1,2 un 1,4 glikolus par aldehīdiem un sarauj saites starp hidroksilgrupas saturošiem oglekļa atomiem. Aldehīdu grupas var noteikt arī, izmantojot aldehīda Šifa reaģentu. In situ sēnītes sieniņās heteropolisaharīdu komplekss intensīvi iekrāsojas purpursarkanā krāsā (metode – skatīt pielikumus).

Lai nomāktu apkārtējo audu krāsojumu, tiek izmantota apstrāde (“pretkrāsošana”) ar gaiši zaļu, metanoldzeltenu u.c. Šajā gadījumā tiek konstatētas tikai sēnīšu šūnas, kas ir ļoti noderīgi patogēna indikācijas stadijā audos vai uztriepes preparātos. Tajā pašā laikā nav iespējams spriest par organisma reakciju un audu izmaiņām uz šādiem preparātiem. Vienmēr ir nepieciešams paralēli priekšmetstikliņi iekrāsot ar PAS metodi un pretkrāsot ar hematoksilīnu.

Praksē tiek izmantota ne tikai PAS metodes klasiskā versija, bet arī dažādas tās modifikācijas: oksidēšana ar hromskābi (jodskābes vietā) ir Bauera reakcija, Gridlija krāsošana, impregnēšana ar metenamīna sudrabu pēc Gomorija-Grokota metodes. . Visi no tiem veiksmīgi tiek izmantoti sēnīšu audu formu noteikšanai, un tie ir balstīti uz vienu un to pašu principu (tehnika - skatīt pielikumu). 3. tabula.

3. tabula

Sēņu audu formu tinktūras īpašības

(patoloģiskā materiālā, histoloģiskajās sekcijās)

Ja tiek pieņemta kriptokokozes diagnoze, ieteicams izmantot metodes specifiskai kapsulu materiāla noteikšanai. Cr.neoformans kas satur glikozaminoglikānus (skābes polisaharīdus). Šim nolūkam tiek izmantota Alcian zilā krāsošana (pēc Mowry metodes), bāzes brūna (pēc Šubiha metodes), krāsošana ar mucikarmīnu. Trīskāršā krāsošana ir ļoti noderīga: PAS reakcija, pēc tam apstrāde ar alcian blue, tad ar hematoksilīnu. Šajā gadījumā kļūst iespējama diferenciācija starp kriptokokiem un citu sēņu audu formām ar līdzīgu morfoloģiju.

Patoloģiskā materiāla (histoloģisko preparātu) aprakstā ir iekļauti dati par sēnīšu audu formu morfoloģiju un izmēru, to tinctorial īpašībām, to saistību ar saimniekaudiem, fagocitozes klātbūtni un pavadošās mikrobiotas noteikšanu.

2.2. Patoloģiskā materiāla sēšana un šūnu kvantitatīva uzskaite rauga sēnīšu izraisītās mikozēs

Sēnīšu kultūru iegūšana ir nepieciešama to identificēšanai un jutības noteikšanai pret pretsēnīšu zālēm.

Krēpas pirms pētījuma homogenizē 5-10 minūtes, kratot ar sterilām pērlītēm. Ja krēpās ir daudz gļotu un tās ir slikti homogenizētas, tām var pievienot 1-2 ml sterila fizioloģiskā šķīduma. Krēpas tiek mikroskopiski pārbaudītas dabīgos vai krāsotos preparātos. Ja, veicot krēpu mikroskopiju ar lielu palielinājumu, redzamības laukā ir redzami sēnītes elementi, tad sēnes jāsēj atšķaidījumos 1:10, 1:100, 1:1000, ja sēnītes elementi netiek konstatēti, krēpas tiek sētas neatšķaidītā veidā. Atšķaidījumus sagatavo šķidrā barotnē (misa, Sabouraud, 1% peptona ūdens) vai sterilā fizioloģiskā šķīdumā. No katra atšķaidījuma 0,1 ml inokulē ar lāpstiņu 2 tasēm misas agara, Sabouraud agara vai MPA, pievienojot antibakteriālas antibiotikas - penicilīnu un streptomicīnu, biomicīnu (100-200 vienības / ml barotnes). Barības barotni provizoriski žāvē termostatā +37 C, jo kondensāta klātbūtnē koloniju augšanai var būt saplūstošs raksturs. Kultūras inkubē 48 stundas termostatā + 37 ° C. Pēc tam, ja ir viena veida rauga koloniju augšana, tos kvantitatīvi reģistrē. Rauga šūnu skaita (n) aprēķinu 1 ml vai 1 g testa materiāla veic pēc formulas n = abs, kur a ir vidējais koloniju skaits vienā Petri trauciņā, b = 10 ar inokulāciju. tilpums 0,1 ml, c ir ekskrementu atšķaidīšanas pakāpe (10 100 1000).

Aprēķina piemērs: uz plāksnēm ar atšķaidījumu 1:1000 izauga vidēji 60 kolonijas, savukārt 1 ml testa ekskrēcijas satur 60 x 10 x 1000 = 600 000 rauga šūnu.

Bronhu, augšžokļa dobumu BAL, FLUSHING šķidrumu, žulti (porcijas A, B, C), kuņģa sulu, divpadsmitpirkstu zarnas saturu, urīnu pārnes centrifūgas mēģenēs un centrifugē 10-15 minūtes, pēc tam ar ātru kustību nosusina supernatantu. . No nogulsnēm sagatavo vietējos preparātus mikroskopijai. Ja mikroskopijas laikā rauga šūnas tiek atrastas katrā redzes laukā, tad inokulāciju veic atšķaidījumos 1:100 un 1:1000, katrs 0,1 ml, uz cietas barotnes un inkubē 37 ° C temperatūrā 48 stundas. Ja rauga šūnas mikroskopijas laikā netiek konstatēti nogulumieži, nogulumi iesēti bez vairošanās. Rauga floras daudzumu aprēķina uz 1 ml patoloģiskā materiāla.

FAKĀLIJAS ņem ar mērkaroti 0,2 g apjomā, ievieto 1,8 ml šķidras misas un rūpīgi izmaisa ar stikla stienīti. Iegūto atšķaidījumu (1:10) ļauj nostāvēties 5-10 minūtes, sagatavo atšķaidījumus 1:100, 1:1000 un inokulē 0,1 ml tilpumā uz 2 Petri trauciņiem ar agara barotni. Uzskaitot saražotās rauga floras daudzumu uz 1 g fekāliju.

CEREBROSPINĀLS šķidrums. Raksturojiet tā izskatu (caurspīdīgs vai duļķains, bezkrāsains vai krāsains, asiņu piemaisījumu klātbūtne, nogulsnes). Mikroskopiskas uztriepes no CSF ​​nogulumiem pēc centrifugēšanas. Tiek sagatavoti trīs preparāti: native - sterila sāls šķīduma pilē: native - tintes pilē un uztriepe krāsošanai ar PAS metodi, saskaņā ar Gram un alcian blue pēc Mowry.

Mikroskopija cerebrospinālais šķidrums dabīgajos un krāsotajos preparātos ļauj konstatēt rauga pumpuru šūnu un sēnītes micēlija fragmentu vai strutojošu meningītu izraisošo baktēriju (meningokoku, pneimokoku, Haemophilus influenzae u.c.) klātbūtni. Liemeņa preparātā var konstatēt kapsulāro sēnīti Cryptococcus neoformans. Tajā pašā laikā uz liemeņa pelēkā fona ir redzamas topošās rauga šūnas, ko ieskauj gaišs kapsulas oreols. Tintes preparāti var saturēt arī rauga formas Candida albicans kapsulas bez gaiša oreola ap šūnu.

kr. neoformāņi var noteikt arī krāsojot ar alcian blue (saskaņā ar Mowry). Krāsošana notiek sakarā ar selektīvu kapsulāro heteropolisaharīdu raksturīgo noteikšanu Cr.neoformans. Ja ar gramu krāsotā preparātā tiek konstatēta baktēriju flora, tiek veikta turpmāka cerebrospinālā šķidruma izmeklēšana pēc atbilstošām bakterioloģiskajām metodēm. Pēc nogulumu mikroskopijas šķidrumu inokulē uz 3 glāzēm svaigi pagatavota, žāvēta misas agara vai Sabouraud agara, kā arī uz šķidrās misas vai Sabouraud šķidrās barotnes. Uz 1. un 2. plates barības agara virsmas uzpilina 2-3 pilienus šķidru nogulšņu un rūpīgi berzē ar lāpstiņu, un 1 pilienu inokulē uz 3. plāksnes agara virsmas, lai noteiktu pavedienveida sēnītes. Atlikušo šķidrumu pārnes uz 5 ml šķidras misas vai Sabouraud agara. Kultūraugus inkubē divos temperatūras apstākļos: 1. kauss - +37 o C, un 2. un 3. kauss un sēja uz šķidras barotnes - +28 o C - +30 o C. Kultūrus +37 o C temperatūrā. skatīts 2. un 5. dienā, un 28 - 30 aptuveni C - 4., 7., 10. augšanas dienā. Ja 5. dienā +37 ° C temperatūrā un 10. dienā 28-30 ° C temperatūrā augšana netiek novērota, inokulāciju veic no šķidras barotnes uz plāksnēm ar misu vai Sabouraud agaru. Ja nav rauga floras augšanas, šķidruma kultivēšanas rezultāts tiek reģistrēts kā negatīvs.

IZLĀDĒJAMĀS FISTULAS. Pētījums sākas ar materiāla mikroskopiju dabīgos vai krāsotos preparātos. Pēc tam materiālu inokulē uz agara barotnes (misas vai Sabouraud), kam 2–3 pilienus izdalījumu uzklāj uz krūzes un ar lāpstiņu izkliedē pa agara virsmu. Inokulācijas inkubē 48 stundas +37°C temperatūrā.

IZKĀRTĪGA gļotāda.

1. Tamponu ievieto mēģenē ar 2 ml šķidras barotnes (misa, Sabouraud's Medium vai MPB) un krata 5–7 minūtes, nemērcējot aizbāzni. Sagatavo atšķaidījumus 1:10, 1:100 un 0,1 ml katra atšķaidījuma inokulē divās plāksnēs ar misas agara, Sabouraud agara vai MPA. Inokulācijas uz cietas barotnes un mēģenē ar šķidru barotni ar tamponu (bagātināšanai) inkubē +37 C temperatūrā. Pēc 48 stundām saskaita koloniju skaitu un nosaka ar tamponu paņemto rauga šūnu skaitu. aptuveni noteikts. Lai to izdarītu, audzēto rauga koloniju skaitu reizina ar 20 un atšķaida. Ja uz plāksnēm, kas ņemtas no atšķaidījumiem, kolonijas neaug, atkārtoti sēj no bagātināšanas barotnes uz vienas plāksnes ar misas agaru.

2. Sēšanu var veikt ar tamponu ar rotāciju virs barības barotnes virsmas. Tajā pašā laikā netiek ņemts vērā rauga koloniju skaits, bet tiek atzīmēta tikai augšanas klātbūtne un intensitāte: atsevišķas kolonijas, ievērojama vai nepārtraukta augšana, mikrobiotas augšanas trūkums.

ASINIS. Venozās asins paraugi asins kultūrai jāatšķaida ar bagātināšanas barotni vismaz 1:5, lai asiņu baktericīdās īpašības neaizkavētu sēnīšu augšanu. Iesējiet attiecīgi 5-10 ml svaigu asiņu 50-100 ml barotnes (šķidra Sabouraud ar 2% glikozi vai Kitt-Tarozzi barotne pēc tās reģenerācijas). Sējai var paņemt asinis ar antikoagulantu (1:10 5% nātrija citrāta šķīdums). Kultūraugus audzē 10 dienas +37°C ar kontroles sēšanu 5. un 10. dienā. Ar sterilu pipeti ņem nogulsnes, no kurām 3 pilienus iesēj ar bakterioloģisko cilpu virs misas agara virsmas Petri trauciņos. Sēklu krūzes ievieto termostatā ar temperatūru +37 ° C uz 2-5 dienām. Rauga floras augšanas gadījumā tiek sniegta provizoriska atbilde par sēnītes klātbūtni asinīs, un kultūra tiek noteikta pēc ģints un sugas.

Ir aprakstīta vēl viena mikofloras asins kultūras metode (H.Riets). Šajā gadījumā 5-10 ml asiņu inokulē ar pilieniem. Uz blīvas barotnes virsmas Petri trauciņā ar sterilu pipeti uzklāj 40-50 pilienus asiņu 0,5 cm attālumā starp pilieniem. Sēju veic uz diviem Petri trauciņiem, vienā traukā inkubējot +37 o C temperatūrā, bet otrā istabas temperatūrā 2-5 dienas.

Orgānu audu GABALUS. Ar pētāmo audu gabalu uz blīvas barotnes virsmas Petri trauciņā izveido nospiedumu, pēc tam izsijā cilpu. To pašu audu gabalu ievieto 50 ml šķidrā barotnē (misa, Sabouraud barotne). Kultūraugus inkubē termostatā +37 aptuveni C temperatūrā 5 dienas.

ĀDAS un nagu svari. Sējas svari ražoti neatkarīgi no mikroskopijas rezultātiem. Lai to izdarītu, ar sterilu mikoloģisko lāpstiņu, kas samitrināta barotnes kondensātā, zvīņas 2–3 punktos pārnes mēģenē uz slīpa misas agara, piespiežot tās pie barotnes virsmas. Atkarībā no pētījumam saņemtā materiāla daudzuma sēju veic 2-3 mēģenēs. Kultūras inkubē termostatā 28-37 aptuveni C temperatūrā līdz 5 dienām.

Plaši tiek izmantotas ātrās identifikācijas metodes C.albicans. Šī suga spēj veidot dīgļu caurules un īsus pseidomicēlija pavedienus dažu stundu laikā (2-4 stundas 37°C temperatūrā) uz asins seruma, olu baltuma, uz Ērgļa barotnes, uz 199 barotnes utt. Praksē laboratorijās izmanto cilvēka serumu (paliekas no seroloģiskām reakcijām), kur 37°C temperatūrā veidojas dīgļvadi, bet pēc 24 stundām pseidomicēliālie samezglojumi. Par veida C.albicansšī parādība ir raksturīga 90% gadījumu. Reti veidojas asni C. tropicalis.

2.3. Patoloģiskā materiāla mikroskopiskā izmeklēšana un sēšana, ja ir aizdomas par pelējuma sēnīšu izraisītām mikozēm

Patoloģisko materiālu var izmeklēt vietējos un krāsotos preparātos. Mikropreparātu pagatavošanai paredzētie priekšmetstikliņi un segstikliņi jāuzglabā spirta un ētera maisījumā (1:1), lai izvairītos no gaisa piesārņošanas ar mikobiotu. Pirms lietošanas priekšmetstikliņus un segstikliņus sterilizē virs degļa liesmas.

Materiāla mikroskopija

krēpu mikroskopija. Vietējo preparātu pagatavošanai krēpas tiek pārnestas uz sterilu Petri trauciņu un pārbaudītas uz melna fona, lai noteiktu sīkas daļiņas (gabaliņus). Izciļņi var būt strutojoši, strutaini-gļotāni, strutaini-asiņaini. Kaulu izmērs svārstās 0,3-3 mm diametrā, to krāsa var būt pelēka, dzeltenīga, zaļgana. Lai pagatavotu dabiskos mikropreparātus, atsevišķus kunkuļus ar sadalošām adatām vai bakterioloģisko cilpu pārnes spirta pilē ar glicerīnu vai 10% KOH šķīduma pilē. Nosedziet ar segstikliņu, viegli nospiediet ar sadalāmo adatu un mikroskopu ar zemu (1:80, 10x okulārs un 8x objektīvs) un augstu (1:400, 10x okulārs un 40x objektīvs) mikroskopa palielinājumu.

Preparātus no mazgāšanas, eksudāta, kā arī žults, urīna, kuņģa sulas, cerebrospinālā šķidruma gatavo no dabīgajiem nogulsnēm vai no nogulsnēm, kas iegūtas centrifugēšanas rezultātā (pie 1500 apgr./min 5 minūtes). Nogulsnes ar cilpu vai Pastēra pipeti pārnes 10% KOH šķīduma pilē uz stikla priekšmetstikliņa, pārklāj ar vāku un pārbauda ar mazu un lielu mikroskopa palielinājumu.

Lai sagatavotu krāsotus preparātus, pētītos kunkuļus vai nogulumu pilienu vienmērīgi sadala ar preparēšanas adatām vai mazāku stikla priekšmetstikliņu pa sterila priekšmetstikliņa virsmu, līdz iegūst plānu smērējumu. Iegūto uztriepi žāvē gaisā, 3-5 minūtes fiksē ar metilspirtu vai Nikiforova maisījumu (vienādās daļās 96% etilspirta un ētera) vai trīs reizes uzliesmo virs degļa liesmas. Fiksētā uztriepe tiek iekrāsota ar Gram, PAS metodi, balto kalkofluoru. Iekrāsotais preparāts tiek mikroskopēts, izmantojot imersijas mikroskopa sistēmu (1:900, okulārs 10x, objektīvs 90x).

Sēšanas materiāls

Pārbaudot jebkuru patoloģisku materiālu pavedienu sēnīšu noteikšanai, to inokulē uz blīvas Sabouraud barotnes vai misas, pievienojot penicilīnu un streptomicīnu (100-200 vienības/ml barotnes). Sēšana tiek veikta divos atkārtojumos, ņemot vērā dažādus temperatūras apstākļus pavedienveida sēņu audzēšanai (+37 ° C un +28 ° C), vienmēr 3 punktos trauka centrā. Inkubācijas laiks ir 4-5 dienas.

Krēpas (atlasīti kunkuļi) ar bakterioloģisko cilpu vai Pastēra pipeti pārnes uz Sabouraud barotnes vai misas virsmu. Inokulācijas vieta ir atzīmēta ar zīmuli Petri trauciņa dibena otrā pusē. Petri trauciņus ar sēklām ievieto termostatā ar vāku uz augšu.

Pēc noteikta inkubācijas perioda sēklu kausus pārbauda un, ja konstatē sporulāciju, nosaka sēnītes kultūru. Ja nav sporulācijas, sēne tiek subkultūrēta Czapek diferenciālajā barotnē turpmākai identifikācijai.

Bronhu skalošanas nogulsnes, augšžokļa dobumus, eksudātu, urīnu, kuņģa sulu (native vai pēc centrifugēšanas) ņem ar pipeti un inokulē 0,1 ml tilpumā. Izkārnījumus atšķaida 1:10 (1 g fekāliju un 9 ml šķidruma) šķidrā Sabouraud barotnē vai šķidrā sterilā izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā, emulģē, 10 minūtes nostādina, lai izgulsnētu lielas daļiņas, inokulē ar supernatantu 0,1 ml tilpumā. . Noņemamo ārējo dzirdes kanālu un rīkli, kas ņemti ar tamponu, apsēj, uzmanīgi pārvelkot katru tampona pusi pa barības barotnes virsmu. Jūs varat inokulēt uztriepes. Lai to izdarītu, tamponus ievieto 10 ml Sabouraud šķidrā barotnē vai šķidrā misā ar stikla pērlītēm un 10 minūtes emulģē, 0,1 ml tamponu izskalojuma inokulē ar zālienu (pēc Leščenko V.M., 1973) vai trīs punktos.

Ādas un nagu zvīņas tiek novietotas uz uzturvielu barotnes virsmas, uzmanīgi nospiežot tās.

Cerebrospinālā šķidruma nogulsnes (centrifugē pie 1500 apgr./min 5 minūtes) inokulē divās barotnes tasītēs, katrā pa 0,1 ml, un to atlikumu inokulē bagātināšanas barotnē (šķidrā Sabouraud barotnē vai šķidrā misā), ielej mēģenēs tilpums 5 ml. Inokulētās krūzes inkubē kā parasti, un mēģenes ar inokulāciju uz bagātināšanas barotnes inkubē + 28 C temperatūrā 10 dienas.

Ja micēlija sēne aug uz cietas barotnes, tās kultūru nosaka pēc šīs inokulācijas, ja nav augšanas uz Sabouraud agara vai misas agara, sēnīti pēta no bagātināšanas barotnes. Lai to izdarītu, sēnīšu kultūru atkal subkultūra uz Czapeka diferenciālās blīvās barotnes un tālāk identificē.

No orgāna audu gabala (biopsija, autopsija) uz blīvas barotnes virsmas izveido nospiedumu ar pētāmā gabala iegriezto pusi trīs punktos. Tajā pašā laikā audu gabalus ievieto 50 ml šķidrā barotnē (Saburo, misa).

Divos līdz trīs atkārtojumos asinis pārbauda, ​​vai nav aizdomas par sēnīti. Inokulē attiecīgi 5 vai 10 ml asiņu 50 vai 100 ml Sabouraud šķidrās barotnes ar 2% glikozi. Kultūru audzē +37 C un +28 C 10 dienas. Pirmo kultūraugu apskati veic pēc 5 dienām, otro - pēc 10 dienām. Piektajā dienā var novērot micēlija sēnītes augšanu filca kamolu veidā apakšā un virsmas plēves veidā. Micēlijs tiek atkārtoti iesēts Czapek diferenciālajā barotnē, lai noteiktu sēnes ģints un sugu. Ja 5. dienā sēnītes augšana netiek konstatēta, sējumus glabā līdz 10 dienām un, ja nav augšanas, pētījuma rezultātus reģistrē kā negatīvus.

Sējot trīspunktos, sēnītes augšanu divos un trijos punktos nosaka kā diagnostiski nozīmīgu, vienā vietā - nejaušu. Ja nepieciešams, iespējama atkārtota sēšana.

Izolētu pelējuma sēņu kultūru identificēšana

Pēc kultūras izolēšanas pavedienu sēnes subkultūrē Czapek diferenciālajā barotnē vispārējai un, ja iespējams, sugu identificēšanai.

Diagnostikas laboratoriju praksē parasti tiek izmantoti kultūras un morfoloģiskās identifikācijas kritēriji: tiek novērtēts sēnīšu kultūras augšanas raksturs agara vidē (kultūras diagnostika, makromorfoloģija) un sēnītes mikromorfoloģija.

Sarežģītos gadījumos tiek izmantotas papildu diagnostikas metodes (enzīmu aktivitātes izpēte, dažu pelējuma sēņu augšanas temperatūras raksturlielumi).

Makromorfoloģijas jēdziens (kultūras iezīmes) ietver kolonijas struktūru (pūkaina, filca, samtaina, zirnekļtīklveida, vilnas, rausta, miltaina u.c.), virsmu (plakanu, salocītu, bedrainu, kupolveida, koremiformu, zonālu utt. .), sēnīšu kolonijas un substrāta pigmentācija (dažādi zaļi, zili, purpursarkani, melni, pelēki u.c. toņi), eksudāta klātbūtne uz kolonijas virsmas.

Sēnītes mikromorfoloģiju no kultūras pēta pēc preparātiem, kurus atkarībā no sēnītes vispārējās piederības gatavo šādi: uzpilina pilienu šķidruma preparātu pagatavošanai (spirta, glicerīna un ūdens vienādās daļās). uz stikla slidkalniņu; tajā tiek ievietots micēlija gabals, ar mikoloģisko lāpstiņu izgriezts no kolonijas trīsstūra formā ar centrālās un perifērās daļas notveršanu, nogriezto gabalu iztaisno ar divām sadalošām adatām uzmanīgi, lai neveidotos gaisa burbuļi. Atsevišķos gadījumos (mukor un rhizopus), gatavojot preparātu, micēliju izklāj uz sausa stikla priekšmetstikliņa, uz tā uzpilina šķidruma pilienu un pārklāj ar segstikliņu. Preparātus aplūko mikroskopā ar mazu un lielu palielinājumu. Viņi pēta substrātu un gaisa micēliju, atzīmē starpsienu (starpsienu) esamību vai neesamību, pievērš uzmanību sporulācijas būtībai: konidiofori ar konīdijām un sporangijas ar sporangiosporām.

Konidiofori atšķiras pēc savas uzbūves: no vienkāršām hifām ar vienu sporu līdz zarotiem kokiem līdzīgiem veidojumiem. Konidiofori atrodas atsevišķi vai grupās, tie ievērojami atšķiras no micēlija veģetatīvām hifām, bezkrāsaini vai krāsaini, augšupejoši, stāvi, lejupejoši, ložņājoši. Tās var sastāvēt no vienas šūnas un no liela skaita dažādas formas un izmēra šūnām, kurām katrai ir savs nosaukums. Piemēram, Aspergillus ģintī konidiofors sastāv no šādām šūnām: kātiņa, pūslīšu pietūkums, sterigmas, konidiju ķēdes. Penicillium ģintī konidioforam ir vienkāršu vai sarežģītu otu forma, kas sastāv arī no dažādām šūnām: rāmijas zariem, metulām, fialīdiem, konidiju ķēdēm.

Pelējuma sēnēm Mucor un Rhizopus ir sporulācija sporangiju veidā ar endosporangiosporām. Sporangijs atrodas sporangiofora galā. Sporangijas ir sfēriskas vai bumbierveida, vairumā gadījumu ar īpašu kolonnu, kas ir sporangiofora turpinājums sporangija iekšpusē. Sporangiosporas ir apaļas, bezkrāsainas vai krāsainas.

Konīdijas (sporas) veidnēs ir polimorfas (cilindriskas, sfēriskas, ovālas, elipsveida, olveida, bumbierveida, nūjveida), vienšūnu un daudzšūnu, dažāda izmēra un krāsas, atsevišķas, ķēdēs vai savāktas galvās un sakārtotas kopās. . Konīdiju virsma var būt gluda, raupja, smaila, kārpaina, sarīga utt.

Mikroskopiskā izmeklēšana un patoloģiskā materiāla sēšana dimorfo sēņu izraisītās mikozēs

Ar šīm mikozēm ir jāņem vērā patogēnu dimorfisms.

Patoloģiskais materiāls primāro patogēno mikotisko infekciju (kokcidioidozes, histoplazmozes, parakokcidioidomikozes, Ziemeļamerikas blastomikozes), kā arī hromomikozes, sporotrichozes un micetomas gadījumā var būt strutas, krēpas, čūlaino bojājumu skrāpējumi uz ādas, gļotādām, asins, mugurkaula membrānām. biopsijas gabali no perēkļu sakāves.

Grūtības noteikt šo mikožu izraisītājus ir apstāklī, ka to dimorfisma dēļ patoloģiskā materiāla mikroskopijā tiks atklātas sēnīšu audu formas, visbiežāk dažādas morfoloģijas rauga šūnas vai sfēras ar endosporām, kas pilnībā atšķiras no mikozes. tās pašas sēnes elementi, kas iegūti no tās kultūras, kas audzēta +28 - +30 ° C temperatūrā uz parastās Sabouraud agaves, ar pH vērtību tuvāk skābai. Tomēr jāpatur prātā, ka dažās dimorfajās sēnēs kultūrā ir iespējams iegūt sēnītes rauga augšanas fāzi, kas bieži atgādina tās audu formu, bet audzē uz olbaltumvielām bagātas barotnes ar vāji sārmainu reakciju (pH). = 7,6 - 7,8 ), 37 o C temperatūrā.

Iepriekš minētais attiecas uz sēnēm: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis Un Sporothrix schenckii.

Šeit minēto sēņu izraisīto mikožu laboratoriskā diagnostika balstās uz audu formu noteikšanu patoloģiskajā materiālā mikroskopijas laikā, patogēna kultūras izolēšanu un identificēšanu pēc kultūras un morfoloģiskām pazīmēm.

Mikroskopisko izmeklēšanu veic nekrāsotiem preparātiem uz stikla priekšmetstikliņa 10% kaustiskā sārma šķīduma vai spirta un glicerīna maisījuma vienādos tilpumos vai iekrāsotās uztriepes (3. tabula).

Patoloģiskā materiāla inokulāciju veic uz iepriekšminētajām uzturvielu barotnēm Petri trauciņos, izmantojot bakterioloģisko lāpstiņu saskaņā ar vispārpieņemto metodi.

2.5. Patoloģiskā materiāla mikroskopiskā izmeklēšana un sēšana dermatomikozes (keratomikozes un dermatofitozes) gadījumā.

Pētījuma objekts ir virspusējas mikozes, kas skar tikai epidermas keratīna slāni, un dermatofīti, kas skar ādu un tās piedēkļus (matus, nagus), kuru izraisītāji ir ar dzemdībām saistītas sēnītes. Trichophyton, Microsporum un Epidermophyton.

Laboratorijas mikoloģiskā izmeklēšana ietver tādas pašas darbības kā citām mikozēm: materiāla mikroskopiju un tīrkultūras iegūšanu, kad to iesēj. Pareiza materiāla vākšana lielā mērā ietekmē mikroskopijas un kultūras panākumus.

Patoloģiskais materiāls tiek pārbaudīts pēc iespējas ātrāk pēc uzņemšanas. Iepriekš tas ir sadalīts trīs daļās: mikroskopijai, audzēšanai un atkārtotai pārbaudei. Patoloģiskā materiāla mikroskopija ir vienkāršākā un ātrākā metode sēnītes klātbūtnes noteikšanai audos. Sasmalcināto materiālu ievieto stikla priekšmetstikliņa vidū pilē 10-20% KOH šķīduma un nedaudz karsē virs spirta lampas liesmas, līdz gar piliena malu iegūst bālganu apmali, kas pārklāta ar vāku. un atstāj uz 5-10 minūtēm (mati, ādas zvīņas) un 30-40 minūtes (naglas) macerācijai un apgaismošanai; materiālu var apstrādāt bez karsēšanas, šim nolūkam preparātu atstāj 20% KOH šķīdumā 30-60 minūtes.

Mikroskopiski sākumā zem neliela, pēc tam liela palielinājuma mikroskopā.

Lai izolētu un identificētu patogēnu, nepieciešama kultūras pārbaude. Inokulēto materiālu pēc iespējas sasmalcina un minimālos daudzumos inokulē uz slīpa agara mēģenēs 2-3 punktos 1-2 cm attālumā Vismaz 2-3 mēģenes (matiņi) un 4-5 mēģenes (ādas un nagu zvīņas) inokulē ar viena parauga materiālu. Dermatofītu primārajai izolācijai vislabāk ir izmantot standarta Sabouraud agara barotni ar 2–4% glikozes vai misas agaru, kas satur antibakteriālas antibiotikas (penicilīns 50 µg/ml + streptomicīns 50 µg/ml vai biomicīns 200 vienības/ml) un antibakteriālas zāles. -pelējuma antibiotikas aktidions (cikloheksimīds) 0,1 - 0,5 mg / ml. Actidion neietekmē dermatofītu augšanu un kavē daudzas pelējuma sēnītes, kā arī Candida un Cryptococcus sugas.

Inokulācijas inkubē 22-30°C (vēlams 28°C) temperatūrā. Dermatofītu augšanas parādīšanās tiek novērota no 4 līdz 12 inkubācijas dienām sēšanas vietās gar ievadītā materiāla malām. Ja 30 dienu laikā augšana nenotiek, audzēšanas rezultātus uzskata par negatīviem. Optimālos apstākļos daudzu dermatofītu primārās kultūras var identificēt 7-10 dienas pēc inokulācijas, bet kultūras jāuzrauga 20-30 dienas. Primārās kultūras aug salīdzinoši lēni, un, ja tiek izmantota barotne bez antibiotikām, dermatofītus var pārņemt ātrāk augošas baktērijas vai pelējums. Kad primārajā inokulācijā parādās augšana, ir jāveic skrīnings no kolonijas malas uz svaigu diferenciālo barotni, lai iegūtu tīrkultūru, kas kalpos kā materiāls izolētā dermatofīta identificēšanai.

2.6. Seroloģiskās metodes mikozes diagnostikai

Seroloģisko metožu vērtību galvenokārt veido: pacientu ar iespējamām invazīvām mikozēm identificēšana; alerģisko slimību mikotiskā rakstura apstiprinājums; riska grupu skrīninga pārbaude mikozes attīstībai.

Kļūdaini pozitīvi seroloģisko pārbaužu rezultāti ir iespējami ar mikocarritu un veseliem cilvēkiem, kuri ir sensibilizēti ar sēnīšu antigēniem, negatīvi testi var būt ar imūndeficītu pat uz notiekošas invazīvas mikozes fona.

Parastās tradicionālās metodes mikozes seroloģiskajai diagnostikai
pietiekami detalizēti aprakstīts /P.N.Kaškins, V.V.Lisins. "Praktiski
rokasgrāmata medicīniskās mikoloģijas jomā”, Medicīna, 1983 /. Tomēr pēdējā laikā
gadu desmitiem ir bijušas manāmas pārmaiņas metodiskajās pieejās / Elinovs N.P.,
2001/. Piedāvātās oriģinālās procedūras antigēnu un antivielu noteikšanai
daži sēnīšu šūnu metabolīti; izveidota īpaša diagnostika
komplekti (“vaļi”), piemēram, Pastorex ® Candida, lai noteiktu
antigēna atkārtotu oligomannozes epitopu "lateksa aglutinācijas" reakcijas
struktūras / izteiktas uz liela skaita makromolekulu
sēnīte; Candida mannāna antigēna noteikšanai, piemēram, in
pacienta ar kandidēmiju serumu, var izmantot Platelia ® Candida komplektu.
Izmantojot pirmo komplektu, antigēnu struktūru noteikšanas slieksnis ir 2,5 ng / ml, izmantojot otro, kopā ar _____________ metodi, noteikšanas slieksnis. - 0,5 ng/ml.

Mikozes izraisītāji, kas visbiežāk tiek atklāti dažādu klīnisko materiālu laboratoriskajos pētījumos

Asinis

• Candida
• Kriptokoks
• Micēlija patogēni reti tiek atklāti asins analīzēs, izņemot Fusarium

cerebrospinālais šķidrums

• Candida
• Kriptokoks

Strutas izdalās no abscesiem, čūlām utt.

• Candida
• Kriptokoks
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Elpošanas izdalījumi (krēpas, BAL, bronhu sukas biopsija, transtraheālais aspirāts)

• Aspergillus
• Candida
• Kriptokoks
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Noņemams, biopsijas materiāls no brūcēm

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Citi biosubstrāti

• Candida
• Kriptokoks

Materiāls no krūtīm, vēdera dobuma; sinoviālais šķidrums

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

stiklveida ķermenis

• Candida
• Aspergillus

IV. Sistēmisko mikožu diagnostikas kritēriji: galīgās diagnozes klīniskie un laboratoriskie parametri

Ezofagīts

• raksturīgu izmaiņu klātbūtne ezofagoskopijā
• sēnītes noteikšana biopsijas materiāla audzēšanas laikā
• pseidomicēlija klātbūtne iekrāsotās uztriepes vai invazīvās sēnīšu augšanas pazīmes biopsijas materiālā

Pneimonija

Pneimonija sakarā ar Candida spp.

• akūtas infiltratīvas izmaiņas plaušu rentgenogrammā, kas sakrīt ar klīniskās izpausmes sēnīšu pneimonija
• atklāšana Candida spp. Kultivējot materiālu no apakšējo elpceļu atkritumiem, kas iegūti no transtorakālās biopsijas, transbronhiālās biopsijas, plaušu biopsijas rezultātiem vai toroskopiskās vadītās biopsijas
• pseidomicēlija noteikšana atbilstoši iekrāsotā biopsijas materiālā

Pneimonija sakarā ar Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• sēnīšu elementu noteikšana audos un pozitīva kultūra
• noturīgi vai progresējoši plaušu infiltrāti, kas ir rezistenti pret antibiotiku terapiju
• viena no norādītajiem patogēniem noteikšana krēpu vai BAL kultivēšanas laikā
• pneimonijas klīniskās pazīmes (klepus, elpas trūkums, "pleiras" sāpes, sēkšana, pleiras berze)
• raksturīgās izmaiņas plaušu rentgenā vai CT:

Subpleiras infiltratīvas, mezglainas, akūtu leņķu vai kavernozas izmaiņas

Halo zīme uz plaušu CT

Infiltratīvo izmaiņu progresēšana līdz ar dobumu veidošanos un “sirpja” simptoma parādīšanos

• citu patogēnu trūkums BAL kultivēšanas laikā, kas varētu izraisīt prezentētās izmaiņas plaušās

Sinusīts

• Akūta sinusīta klīniskās un radiogrāfiskās pazīmes
• mikozes mikroskopiskās un kultūras pazīmes aspirāta vai biopsijas materiāla izpētē

urīnceļu infekcijas

• >1 x 10 cfu/mL konstatēts atkārtotās pareizi savākta urīna kultūrās

fungēmija

• Vienreizēja sēnīšu noteikšana asins kultivēšanas laikā, kad ķermeņa temperatūra paaugstinās virs 38 ° C

Akūta izplatīta mikoze

• Fungēmija kombinācijā ar dziļo audu (tostarp zemādas audu) bojājuma kultūras vai histoloģiskām pazīmēm vai patogēna identificēšanu no diviem normāli steriliem biosubstrātiem

Endoftalmīts

• endoftalmīta oftalmoloģiskās pazīmes
• patogēna identificēšana no acs, asinīm vai citiem izplatīšanas perēkļiem

Abscess vai osteomielīts

• osteomielīta rentgenogrāfiskās/CT/MRI pazīmes
• patogēna identificēšana aspirātā vai biopsijas materiālā

Meningīts

• CSF izmaiņu noteikšana, apstiprinot iekaisuma klātbūtni, un sēnīšu noteikšana ar CSF mikroskopiju
• sēnīšu noteikšana ar CSF kultūru vai antigēnu noteikšanu Cr.neoformans, Candida un Aspergillus CSF

Hroniska diseminēta (hepatolienāla) kandidoze

Iespējams

• pastāvīgs vai periodisks drudzis pēc neitropēnijas perioda beigām kombinācijā ar raksturīgās iezīmes aknu, liesas vai nieru bojājumi

Pierādīts

• iepriekš minētais apvienojumā ar sēšanu Candida spp. no asinīm pirms aknu, liesas vai nieru bojājuma pazīmju parādīšanās vai ar kulturālām, histoloģiskām kandidozes pazīmēm biopsijas materiālā no perēkļiem

V. SĒNĪŠU INFEKCIJU CĒLOŅI

Sēnīšu infekciju un to patogēnu klasifikācijai ir dažādi principi. Mums šķiet praktiski visvienkāršākais un lietderīgākais patogēnās sēnes sadalīt 5 galvenajās grupās:

1. Virspusējo mikožu patogēni;

2. Dermatomikozes izraisītāji;

3. Subkutānu mikožu patogēni;

4. Dziļo mikožu izraisītāji (primārie patogēni mikromicīti, oportūnistisko infekciju patogēni).

5. Pseidomikozes izraisītāji.

* Jāuzsver, ka pirmo trīs grupu patogēni imūnsupresīviem pacientiem var izraisīt fungiēmiju un vairāku orgānu bojājumus.

Nākamajās sadaļās mēs sniedzam mikozes izraisītāju aprakstu pēc vienas shēmas: tā nosaukums saskaņā ar pieņemto nomenklatūru, sinonīmu saraksts, koloniju makroskopisks apraksts uz barības vielu barotnēm un mikroskopisks sēnīšu elementu apraksts. redzams zem mikroskopa vietējos preparātos un no kolonijām. Tāpat sniegti dati par sēņu izplatību dabā un uzskaitītas to izraisītās slimības.

Ādas sēnīšu slimību klīniskā aina ir ļoti polimorfa, tāpēc visos gadījumos diagnoze ir jāapstiprina ar laboratorisko pētījumu metodēm. Mikožu laboratoriskai diagnostikai tiek izmantotas mikroskopiskās, luminiscējošās, kultūras, imunoloģiskās (alergoloģiskās un seroloģiskās) pētījumu metodes, kā arī eksperimenti ar dzīvniekiem.

Mikozes laboratoriskā diagnostika sastāv no vairākiem posmiem. Parastā klīniskajā praksē tie parasti aprobežojas ar inficētā materiāla mikroskopisku un kultūras izmeklēšanu. Ja nepieciešams, šīs metodes papildina imunoloģiskās, histoloģiskie pētījumi, izmēģinājumu dzīvnieku infekcija. Dažās ādas mikozēs luminiscējošajai metodei ir svarīga papildu loma diagnostikā.

Patoloģiskā materiāla uzņemšana.

Mikozes laboratoriskā pētījuma panākumi lielā mērā ir atkarīgi no pareizas patoloģiskā materiāla savākšanas. Tā kā sēnītes spēj inficēt dažādus cilvēka orgānus, tad, ja ir aizdomas par mikozi, nepieciešams izmeklēt dažādus patoloģiskus materiālus. Dermatoloģijas praksē visbiežāk nākas saskarties ar mikozēm, kurās ādas zvīņas, mati, nagi tiek pakļauti sēnīšu pārbaudei. Ja ir aizdomas par dziļām un sistēmiskām mikozēm, var būt nepieciešama krēpu, mazgāšanas, urīna, fekāliju, strutas, gļotādu izdalījumu, asiņu, orgānu gabalu un audu biopsijas sēnīšu laboratoriskā diagnostika.

Ādas bojājumiem, no kuriem paredzēts ņemt patoloģisku materiālu, pēc dažām dienām vai nedēļām ir jāpārtrauc visa ārstēšana. Jāpatur prātā, ka vāju dezinfekcijas līdzekļu vai pat vienaldzīgu līdzekļu lietošana var traucēt pētījumu. Tūlīt pirms patoloģiskā materiāla savākšanas bojājums jāārstē ar 96% spirta vai ksilola šķīdumu. Materiālu vislabāk ņemt no svaigiem, bet jau pilnībā attīstītiem bojājumiem. No perēkļu perifērijas jānokasa ādas zvīņas, sēnes šeit visbiežāk sastopamas gan micēlija, gan sporu veidā. Ādas zvīņas noņem ar skalpeli, garozas – ar epilācijas pinceti.

Pacientiem ar galvas ādas mikozi skartie mati tiek noņemti ar epilācijas pinceti. Pētījumiem ir jāņem īsi, savīti, izliekti loka vai komata veidā, kā arī gari, bet pie pamatnes pārklāti ar apvalku, mati. Ja ir aizdomas par favusu, jāatceras, ka mati nevis lūst, bet kļūst blāvi, nedzīvi, pelēcīgi.

No skarto nagu plākšņu virspusējiem perēkļiem skrāpējumus veic ar skalpeli, sabiezinātās nagu plāksnes nogriež ar skalpeli vai nagu knaibles.

Šķidrais patoloģiskais materiāls tiek savākts aseptiski sterilos traukos, ādas pārslās, nagos un matos - uz vienkārša vai mīksta pergamenta papīra loksnēm.

Noņemamo no gļotādām inokulācijai ņem ar uzsūcošas vates tamponu, ko pēc tam ievieto sausā sterilā mēģenē vai mēģenē ar 2 ml uzturvielu barotnes (Saburo misa). Materiālu no maksts iegūst no aizmugures fornix; no dzimumlocekļa galvas - no koronālā vagas reģiona.

Materiālu no ārējā dzirdes kanāla ņem ar cilpu vai tamponu, ko ievieto mēģenē.

Laboratorijā saņemto materiālu pārbauda 1 stundas laikā pēc ņemšanas, uzglabājot istabas temperatūrā, vai ne ilgāk kā 3 stundas, uzglabājot ledusskapī 4 °C temperatūrā.

Sēnīšu izpētei asinis ņem no kubitālās vēnas 5-10 ml apjomā un nekavējoties pievieno kolbā ar šķidru barotni vai vienādu daudzumu nātrija citrāta.

Ja nepieciešams pētīt sēnīšu biopsijas materiālu, to ievieto sterilā Petri trauciņā un izmanto mikroskopijai, inokulācijai uz barības vielu barotnēm un histoloģisko preparātu sagatavošanai.

Mikroskopiskā izmeklēšana.

Patoloģiskā materiāla mikroskopisko izmeklēšanu sēnīšu noteikšanai veic ar dabīgiem un krāsotiem preparātiem. Lai sagatavotu nekrāsotus preparātus, iegūto materiālu sasmalcina ar skalpeli vai sadalīšanas adatu un ievieto stikla priekšmetstikliņa vidū. Lai skaidrāk identificētu sēnītes elementus, materiāls tiek dzidrināts (macerēts). Šim nolūkam viņi izmanto dažādas vielas, visbiežāk kodīgo sārmu (KOH, NaOH), kas izšķīdina epidermas zvīņas, gļotas, strutas, attīra matu pigmentu un tādējādi padara sēnītes pieejamas izpētei.

Dažās laboratorijās preparātu dzidrināšana mikroskopiskai izmeklēšanai tiek veikta ar 15 - 30% KOH šķīdumu, kam pievienoti 5 - 10% Parker komerciālās tumši zilās tintes (Parker's Superchrome Blue-BlackInk).Ar šo krāsu hifas. un sporas ir iekrāsotas zilā krāsā.