बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च के प्रकार। दिशानिर्देश। नैदानिक ​​सूक्ष्म जीव विज्ञान में अवसरवादी सूक्ष्मजीवों के बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के तरीके

19 दिसंबर, 1991 को RSFSR के स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा स्वीकृत


दिशा-निर्देशएएन कल्युक द्वारा संकलित।

अवसरवादी रोगजनकों के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन

माइक्रोफ्लोरा के एक व्यापक प्रयोगशाला अध्ययन में सामग्री के बैक्टीरियोस्कोपिक और बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन शामिल हैं, जो कि उपचार के दौरान, साथ ही एक आउट पेशेंट के आधार पर इलाज किए गए रोगियों में संकेतों के अनुसार, गतिशीलता में किया जाता है। घने पोषक माध्यम पर नैदानिक ​​सामग्री को टीका लगाने की सलाह दी जाती है, जो एक सूक्ष्मजीव के विकास के दमन को दूसरे द्वारा रोकता है और विकसित कॉलोनियों की संख्या के मात्रात्मक अनुमान की अनुमति देता है। सूक्ष्मजीवों के विकास की तीव्रता को क्रॉस में व्यक्त किया जा सकता है और नैदानिक ​​​​सामग्री के 1 मिलीलीटर में एक निश्चित संख्या में माइक्रोबियल कोशिकाओं की सामग्री के अनुरूप हो सकता है:

++++ मिली-जुली कॉलोनियों की प्रचुर वृद्धि (10 m/cl)

+++ पृथक कॉलोनियों की भारी वृद्धि (10 मीटर/सेल)

++ कई गणनीय कॉलोनियों की मध्यम वृद्धि (कम से कम 50) (10-10 मीटर/केएल)

+ एकल कॉलोनियों की खराब वृद्धि (30-50) (10 मीटर/सेल)।

खुराक की बुवाई के साथ, परीक्षण सामग्री के 1 मिलीलीटर या 1 ग्राम में सूक्ष्मजीवों की पूर्ण सामग्री निर्धारित की जाती है। सामग्री के 1 मिली (1 ग्राम) में बैक्टीरिया की एटियलॉजिकल रूप से महत्वपूर्ण सामग्री 10 और उससे अधिक है। एक निश्चित प्रकार के सूक्ष्मजीव की मात्रात्मक प्रबलता पीयोइन्फ्लेमेटरी प्रक्रिया में इसकी भागीदारी के संकेतकों में से एक है। बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणामों की अंतिम व्याख्या एनामेनेस्टिक डेटा, नैदानिक ​​लक्षणों और एंटीबायोटिक चिकित्सा के परिणामों का अध्ययन करने के बाद की जाती है। बुवाई के लिए सामग्री भेजते समय कुछ नियमों का पालन करना चाहिए। एंटीबायोटिक चिकित्सा की शुरुआत से पहले या रोगी के शरीर से उनके उन्मूलन के लिए आवश्यक जीवाणुरोधी दवाओं के प्रशासन के बाद ऐसी अवधि के बाद सामग्री की जांच की जानी चाहिए (थूक परीक्षण के लिए 2-3 दिन, मूत्र के लिए 4-7 दिन)। एंटीबायोटिक दवाओं के उपयोग से सूक्ष्मजीवों के अलगाव की आवृत्ति 3-4 गुना कम हो जाती है। डायग्नोस्टिक सामग्री की फसलें डायनेमिक्स (3-5 बार) में की जाती हैं, जो रोग के एटियलजि को स्पष्ट करती है, जिससे रोगज़नक़ की दृढ़ता की अवधि का पता लगाना, चिकित्सा की प्रभावशीलता को नियंत्रित करना संभव हो जाता है। सामग्री के संग्रह और बुवाई के बीच का अंतराल 1-2 घंटे से अधिक नहीं होना चाहिए।

ऊपरी के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन श्वसन तंत्र(ग्रसनी, नाक, मुंह)। अध्ययन के लिए सामग्री है: बायोप्सी के दौरान बलगम, प्यूरुलेंट डिस्चार्ज, क्रस्ट, फिल्म, घुसपैठ के टुकड़े। से सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान के लिए सामग्री मुंहसबसे अधिक प्रभावित स्थानों से लार ग्रंथियों के नलिकाओं, जीभ की सतह, घावों (चम्मच से स्क्रैपिंग) के बाहर निकलने पर श्लेष्म झिल्ली से एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ एक खाली पेट पर लिया जाता है। यदि कोई फिल्म है, तो बाद वाले को चिमटी से हटा दिया जाता है। नाक गुहा से सामग्री एक सूखे बाँझ कपास झाड़ू के साथ ली जाती है। सामग्री को पेट्री डिश पर रक्त, जर्दी-नमक अगर, साबुरो के माध्यम से डाला जाता है। जब एक झाड़ू के साथ बुवाई की जाती है, तो सामग्री को झाड़ू की पूरी सतह से 1-2 सेमी के एक छोटे से क्षेत्र में, और फिर पूरी सतह पर स्ट्रोक के साथ माध्यम में रगड़ दिया जाता है। इसके साथ ही बुवाई के साथ ही चने के अनुसार स्मीयरों को तैयार कर दाग दिया जाता है।

निचले श्वसन पथ के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन। अध्ययन के लिए मुख्य सामग्री थूक है, जिसे अध्ययन के दिन, सुबह अपने दांतों को ब्रश करने और ताजे उबले पानी से अपना मुंह धोने के बाद एकत्र किया जाता है। पर प्रचुर मात्रा में उत्सर्जनथूक, पहले भाग को थूक में डाला जाना चाहिए, और बाद वाले को बाँझ व्यंजनों में एकत्र किया जाता है और प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है। थूक के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन करने के लिए, बिना पतला थूक (गुणात्मक विधि) की बुवाई और कमजोर पड़ने वाली विधि, जिसे मात्रात्मक कहा जाता है, दोनों का उपयोग किया जाता है। बुवाई के लिए एक गुणात्मक विधि के साथ, थूक के शुद्ध गांठ का उपयोग किया जाता है, मौखिक गुहा के माइक्रोफ्लोरा से खारा में धोया जाता है। मात्रात्मक तरीकों से, 1 मिलीलीटर थूक को समरूप बनाया जाता है। फिर इसमें मौखिक सूक्ष्मजीवों की संख्या को कम करने के लिए तनुकरण किया जाता है। दोनों विधियों से कल्चर के साथ-साथ एक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम द्वारा दाग दिया जाता है। पुरुलेंट और म्यूकोप्यूरुलेंट थूक, जिसमें वायुकोशीय उपकला के ल्यूकोसाइट्स और कोशिकाएं होती हैं, श्लेष्म में कोशिकाएं, जिनमें उपस्थिति निचले श्वसन पथ के उत्सर्जन की विशेषता होती है, अनुसंधान के अधीन हैं। देशी थूक के स्मीयर में मौजूद माइक्रोफ्लोरा पर ध्यान दें, विशेष रूप से कैप्सुलर डिप्लोकॉसी (न्यूमोकोकी), छोटी ग्राम-नकारात्मक छड़ें (पफीफर रॉड), आदि।

गुणवत्ता विधि। प्रयोगशाला में, थूक को पेट्री डिश में डाला जाता है, 2-3 प्युलुलेंट गांठों का चयन किया जाता है, जिन्हें एक बार खारा में धोया जाता है, और फिर रक्त और जर्दी-नमक अगर, एंडो और सबुरो मीडिया पर टीका लगाया जाता है। बुवाई एक बाँझ कांच के रंग के साथ की जाती है, समान रूप से पोषक माध्यम की सतह पर सामग्री को रगड़ कर। एंटीबायोटिक दवाओं (स्ट्रेप्टोमाइसिन, पेनिसिलिन, टेट्रासाइक्लिन, एरिथ्रोमाइसिन और लेवोमाइसेटिन) के साथ डिस्क को टीकाकरण के तुरंत बाद रक्त अगर प्लेट पर रखा जाता है, जिससे टीकाकरण में प्रचलित माइक्रोफ्लोरा की दवा संवेदनशीलता के बारे में स्पष्ट जानकारी प्राप्त करना संभव हो जाता है। दूसरे दिन, विकसित कालोनियों की संख्या को ध्यान में रखा जाता है (50 से अधिक कालोनियों की वृद्धि को एटियलॉजिकल रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है), एक मोनोकल्चर में उनकी वृद्धि के दौरान जनसंख्या की एकरूपता और दवा संवेदनशीलता।

मात्रात्मक पद्धति। प्रयोगशाला में दिए गए थूक से 1 मिलीलीटर लिया जाता है, मांस-पेप्टोन शोरबा के 9 मिलीलीटर को जोड़ा जाता है और 20 मिनट के लिए मोतियों के साथ जार में समरूप किया जाता है। परिणामी इमल्शन से दस गुना सीरियल dilutions तैयार किए जाते हैं। बुवाई एक छोटे से कमजोर पड़ने से उल्टे क्रम में की जाती है। पतला थूक 10 और 10 प्रति रक्त अगर प्लेट के 0.1 मिलीलीटर टीका लगाएं। जर्दी-नमक अगर, एंडो और सबौराड मीडिया पर बुवाई 1:10 के प्रारंभिक कमजोर पड़ने से की जाती है। फसलों को एक दिन के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। दूसरे दिन, कपों को देखा जाता है और लाखों में प्रत्येक प्रकार के सूक्ष्मजीवों की संख्या को ध्यान में रखा जाता है। 1 मिलीलीटर थूक में 10 मीटर / सीएल और उससे अधिक की जीवाणु सामग्री को नैदानिक ​​​​रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है।

ब्रोन्कियल धुलाई की बुवाई, तरल पदार्थ को धोना। परीक्षण सामग्री से बलगम की गांठें ली जाती हैं, जो शारीरिक खारा में पूर्व धोने के बिना, ठोस पोषक माध्यम (थूक संस्कृति देखें) और चीनी शोरबा के साथ एक परखनली में टीका लगाया जाता है। बलगम की गांठ की अनुपस्थिति में, पाश्चर पिपेट में एकत्रित सामग्री को टीका लगाया जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर दिन के दौरान ऊष्मायन।

आंखों के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन। एक डॉक्टर द्वारा शोध के लिए नमूने एक बाँझ कपास झाड़ू या कांच की छड़ के साथ लिए जाते हैं। सामग्री को प्रभावित क्षेत्रों से लिया जाता है और 0.5% चीनी शोरबा में बोया जाता है। वृद्धि के अभाव में, 48 घंटों के बाद एक नकारात्मक प्रतिक्रिया जारी की जाती है।

कान से स्वाब की जांच। सामग्री को श्रवण नहर से एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ लिया जाता है और रक्त और जर्दी-नमक अगर, सबौराउड माध्यम पर टीका लगाया जाता है, सामग्री को माध्यम के क्षेत्र पर रगड़ता है, और फिर इसे पूरे पकवान पर रगड़ता है।

मूत्र अध्ययन। अध्ययन सामान्य पेशाब के दौरान प्राप्त या कैथेटर द्वारा लिए गए सुबह के मूत्र के औसत हिस्से के अधीन है। बैक्टीरियूरिया का एक संकेतक, होना नैदानिक ​​महत्व, 1 मिली मूत्र में 100,000 या अधिक रोगाणुओं की उपस्थिति मानी जाती है।

शोध का पहला दिन। एक मानक (3 मिमी) मूत्र का बैक्टीरियोलॉजिकल लूप (पूरी तरह मिश्रित) पेट्री डिश में सेक्टर ए, आई, II और III में 5% रक्त या साधारण अगर के साथ बोया जाता है। वहीं, सेक्टर ए के माध्यम के क्षेत्र में बुवाई की जाती है, सामग्री को पूरी सतह पर समान रूप से रगड़ा जाता है, फिर बिना नई सामग्री लिए पोषक माध्यम पर स्ट्रोक के साथ वही लूप किया जाता है सेक्टर I (3-4 स्ट्रोक), सेक्टर I से II तक, II सेक्टर से - III में।

तालिका नंबर एक

पेट्री डिश के विभिन्न क्षेत्रों में बैक्टीरिया कालोनियों की संख्या, बैक्टीरियूरिया की डिग्री के आधार पर (वी.एस. राबिनोव्स्की और वी.वी. रोडोमैन के अनुसार)

शोध का दूसरा दिन। बैक्टीरियूरिया की डिग्री तालिका 1 के अनुसार निर्धारित की जाती है, यह उस क्षेत्र पर निर्भर करता है जिसमें सूक्ष्मजीव की कॉलोनियों की वृद्धि पाई जाती है। 1 मिली मूत्र में 100 हजार से कम रोगाणुओं की उपस्थिति में, कॉलोनियों की वृद्धि केवल पेट्री डिश के सेक्टर ए में देखी जाती है। सेक्टर I में कॉलोनी विकास की उपस्थिति अधिक इंगित करती है एक उच्च डिग्रीजीवाणु सबसे छोटी ग्रोथ वाले सेक्टर में कॉलोनियों की गिनती करना मुश्किल नहीं है। ज्यादातर मामलों में सेक्टर फसलों की विधि अध्ययन के दूसरे दिन पहले से ही शुद्ध संस्कृति में रोग के प्रेरक एजेंट को अलग करना संभव बनाती है।

घावों के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन, पंचर, एक्सयूडेट्स, शोधित ऊतक। रक्त और साधारण मांस-पेप्टोन अगर, चीनी शोरबा के साथ टेस्ट ट्यूबों में एक पाश्चर पिपेट के साथ एक्सयूडेट्स और पंक्टेट्स को टीका लगाया जाता है। निदान सामग्री के साथ एक स्वाब पेट्री डिश पर 5% रक्त और 10% जर्दी-नमक अगर के साथ बोया जाता है। सामग्री को माध्यम के किनारे पर रगड़ा जाता है, और फिर उसी स्वाब या बैक्टीरियोलॉजिकल लूप का उपयोग करके डिश पर फैला दिया जाता है।

महिला जननांग अंगों के माइक्रोफ्लोरा का अध्ययन। स्राव एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ एकत्र किया जाता है और पेट्री डिश पर 5% रक्त अगर, जर्दी-नमक अगर और चीनी शोरबा के साथ एक टेस्ट ट्यूब में, साथ ही एंडो माध्यम पर टीका लगाया जाता है।

पित्त का अध्ययन। पित्त को जांच के दौरान या सर्जरी के दौरान बाँझ ट्यूबों में एकत्र किया जाता है और नमूने के क्षण से 2 घंटे के बाद प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है। रक्त अगर प्लेट और एंडो माध्यम पर 0.1 मिलीलीटर पित्त चढ़ाया जाता है। फसलों और शेष स्रोत सामग्री को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है। 24 घंटों के बाद, प्राथमिक टीकाकरण के परिणामों को घने पोषक माध्यम पर प्रत्येक प्रजाति की कॉलोनियों की संख्या की गणना के साथ ध्यान में रखा जाता है।

रक्त अध्ययन। त्वचा (शराब, ईथर) के सावधानीपूर्वक उपचार के बाद रोगी के बिस्तर पर रक्त बोया जाता है। क्यूबिटल नस से, 10 मिलीलीटर रक्त लिया जाता है, जिसे दो फ्लास्क में डाला जाता है: पहला 150-200 मिलीलीटर चीनी शोरबा और दूसरा थियोग्लाइकॉल माध्यम (प्रत्येक 5 मिलीलीटर) के साथ। फसलों को थर्मोस्टेट में 10 दिनों तक रखा जाता है। दूसरे, तीसरे, 5वें और 10वें दिन पेट्री डिश पर 5% ब्लड एगर के साथ कंट्रोल सीडिंग की जाती है। दो चरणों में पोषक माध्यम के साथ एक शीशी में 5 मिलीलीटर रक्त की बुवाई की जा सकती है: ठोस और तरल (1% ग्लूकोज के साथ 5% रक्त अगर का बेवल और 0.5% चीनी शोरबा का 50 मिलीलीटर)। यह तकनीक कई पुन: बुवाई की आवश्यकता को समाप्त करती है, पर्यावरण के माइक्रोफ्लोरा के साथ फसल के दूषित होने की संभावना को समाप्त करती है, और आपको बढ़ी हुई कॉलोनियों की संख्या को ध्यान में रखने की अनुमति देती है (यानी, बैक्टरेरिया की तीव्रता का आकलन करने के लिए) . बुवाई को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 दिनों के लिए रखा जाता है। हर दिन, शीशियों की सामग्री को हिलाया जाता है और शीशी को झुकाकर घने पोषक माध्यम के बेवल की सतह को सिक्त किया जाता है। जब रक्त अग्र तिरछा पर कॉलोनियां बढ़ती हैं, तो उनसे स्मीयर तैयार किए जाते हैं और आगे की पहचान बैक्टीरियोलॉजी में आम तौर पर स्वीकृत नियमों के अनुसार की जाती है। 10वें दिन सूक्ष्मजीवों के विकास की अनुपस्थिति में, अंतिम उत्तर दिया जाता है - रक्त संस्कृति बाँझ होती है।

आंतों के डिस्बिओसिस पर शोध। मल की एक मनमाना मात्रा पहले से तैयार और तौले गए (उपपार्चमेंट या वैक्स पेपर) बाँझ कागज़ों पर ली जाती है जिनका आकार 3x2 होता है और एक मरोड़ पैमाने पर तौला जाता है। सामग्री के साथ कागज को एक बाँझ टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। मल के नमूने का वजन, कागज के वजन को घटाकर, 9 से गुणा किया जाता है। गुणन के बाद प्राप्त योग लवण की मात्रा के बराबर होता है जिसे टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाना चाहिए। पतला 1:10 (आई)।

उदाहरण के लिए: कागज के एक टुकड़े का वजन 20 मिलीग्राम . है

कागज के एक टुकड़े के साथ मल का वजन 420 मिलीग्राम

420-20=400 मिलीग्राम; 400 mg9=3600 (3.5 मिली)।

एक कांच की छड़ या एक बाँझ पिपेट के साथ पायसीकरण के बाद, निलंबन को कमरे के तापमान पर 10-15 मिनट के लिए खड़े होने की अनुमति दी जाती है और 0.1 मिलीलीटर को अगले टेस्ट ट्यूब में 9.9 मिलीलीटर खारा (कमजोर पड़ने 10) के साथ स्थानांतरित किया जाता है। फिर मल को 10 के टिटर तक पतला कर दिया जाता है। मुख्य कमजोर पड़ने (10) से, आंतों के परिवार (प्लॉस्किरेव, लेविन माध्यम) के रोगजनक रोगाणुओं को अलग करने के लिए ठोस पोषक तत्व मीडिया पर टीकाकरण किया जाता है। इसी समय, तरल संवर्धन मीडिया (मुलर, सेलेनाइट, मैग्नीशियम) पर एक बड़े पैमाने पर (0.5-1.0) टीका लगाया जाता है। एक परखनली से जिसमें मल को 10 तक पतला किया जाता है, सबौराड और जेएसए माध्यम की सतह पर 0.1 मिली मिलाया जाता है। 10 के कमजोर पड़ने से, 0.5% रक्त अगर और एंडो माध्यम, 0.1 मिलीलीटर प्रत्येक के साथ प्लेटों पर टीकाकरण किया जाता है। पृथक कॉलोनियों की वृद्धि प्राप्त करने के लिए कांच के मोतियों या स्पैटुला का उपयोग किया जाता है। कांच के गोल मोतियों के 12-14 टुकड़े (पहले से निष्फल) बीज के साथ एक कप में उतारे जाते हैं। 1 मिनट के लिए मोतियों के साथ कप को थोड़ा हिलाकर, सामग्री को पोषक माध्यम पर समान रूप से वितरित किया जाता है। मोतियों के साथ बुवाई उस माध्यम से शुरू होती है जिस पर सबसे बड़ा तनुकरण बोया गया था (10), मोतियों को एक छोटे तनुकरण में स्थानांतरित करना। एनारोबिक बिफीडोबैक्टीरिया को अलग करने के लिए, 10, 10 और 10 के कमजोर पड़ने से 2 ट्यूबों (0.1 और 1 मिली प्रत्येक) में ब्लाउरॉक के माध्यम से 1 घंटे के लिए पुन: उत्पन्न करें। टीकाकरण के बाद, निलंबन को समान रूप से वितरित करने के लिए ट्यूबों को हथेलियों के बीच सख्ती से घुमाया जाता है। एरोबेस उगाने के लिए वातावरण को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस (सबौराड - 20 डिग्री पर) 18-24 घंटों के लिए रखा जाता है। Blaurock के माध्यम पर अवायवीय वृद्धि को 48-72 घंटों के बाद ध्यान में रखा जाता है। बुवाई के अगले दिन, 1 ग्राम मल में एस्चेरिचिया कोलाई और अन्य रोगाणुओं की संख्या उचित पोषक तत्व पर उगाई गई कॉलोनियों की संख्या से निर्धारित होती है। माध्यम, टीका सामग्री की मात्रा और इसके कमजोर पड़ने की डिग्री के लिए पुनर्गणना। इसलिए, यदि 10 (1:100,000) के कमजोर पड़ने से 0.1 मिली मल को टीका लगाने पर एंडो माध्यम पर 30 लैक्टोज-नकारात्मक कॉलोनियां बढ़ती हैं, तो गणना को 30 से 10 और 100,000 से गुणा किया जाना चाहिए, अर्थात। 1 ग्राम में 30,000,000 लैक्टोज-नकारात्मक एंटरोबैक्टीरिया होंगे। एस्चेरिचिया कोलाई के लैक्टोज-नकारात्मक और हेमोलिटिक कॉलोनियों की संख्या, स्टेफिलोकोकस, प्रोटीस और अन्य सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति को ध्यान में रखा जाता है। सूक्ष्मजीवों के एंजाइमेटिक गुण और दवा संवेदनशीलता निर्धारित की जाती है। ब्लौरॉक के माध्यम से परखनलियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं। माइक्रोस्कोप के तहत, बिफीडोबैक्टीरिया में विशेषता ग्राम-पॉजिटिव छड़ की उपस्थिति होती है, जो सिरों पर मोटी या शाखित होती है, जिसे रोमन अंक V के रूप में व्यवस्थित किया जाता है, जो अक्सर समूहों के रूप में होता है। बैक्टीरियोलॉजिस्ट का उत्तर सूक्ष्मजीवों के प्रत्येक समूह के प्रतिशत या पूर्ण संख्या को इंगित करता है।

सूक्ष्मजीवों की पहचान। सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के तरीके रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, एंटीजेनिक और संस्कृतियों के अन्य गुणों के अध्ययन पर आधारित हैं।

रूपात्मक गुणों का अध्ययन नैदानिक ​​सामग्री की बैक्टीरियोस्कोपी द्वारा किया जाता है और घने और तरल संस्कृति मीडिया पर उगाई गई कॉलोनियों से स्मीयर किया जाता है। कांच की स्लाइड्स पर स्मीयर्स को एक बर्नर फ्लेम पर या तरल फिक्सेटिव्स (96 °, अल्कोहल, निकिफोरोव का मिश्रण) में ग्राम के अनुसार दाग दिया जाता है। थूक से स्मीयरों को देखते समय, सभी उपलब्ध माइक्रोफ्लोरा का आकलन किया जाता है: ग्राम-पॉजिटिव कोक्सी (स्टैफिलोकोसी, माइक्रोकोकी) के समूहों की उपस्थिति, ग्राम-पॉजिटिव कोसी (स्ट्रेप्टोकोकी) की चेन, छोटे लैंसोलेट डिप्लोकॉसी जो बिना दाग वाले कैप्सूल (न्यूमोकोकस) के एक क्षेत्र से घिरे होते हैं। , ग्राम-नकारात्मक कोक्सी (निसेरिया); ग्राम-नकारात्मक छड़ (आंतों, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, प्रोटीस); एक हल्के प्रभामंडल (क्लेबसिएला) के रूप में एक कैप्सूल से घिरे गोल सिरों वाली ग्राम-नकारात्मक छड़ें, समूहों के रूप में छोटी ग्राम-नकारात्मक छड़ें (हीमोफिलिक बैक्टीरिया), आदि। बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा सांकेतिक है। आगे के शोध में पोषक तत्व मीडिया पर सामग्री का टीकाकरण, शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव, उनकी पहचान और दवा की संवेदनशीलता का निर्धारण शामिल है। ठोस और तरल पोषक मीडिया पर उगाई गई संस्कृतियों को देखने पर सांस्कृतिक गुणों का अध्ययन किया जाता है। सघन माध्यमों पर कालोनियों के आकार, रंग, पारदर्शिता, आकृति, वर्णक की उपस्थिति, कॉलोनी के चारों ओर हेमोलिसिस और इसकी प्रकृति आदि को ध्यान में रखा जाता है। तरल मीडिया पर, उनकी पारदर्शिता, तलछट (नीचे की वृद्धि) या माध्यम की सतह पर एक फिल्म की उपस्थिति नोट की जाती है। जैव रासायनिक गुणों का अध्ययन एंजाइमैटिक सैक्रोलाइटिक गतिविधि के निर्धारण पर आधारित है, एरोबिक और एनारोबिक खेती की स्थितियों के तहत पोषक तत्वों का उपयोग करने की क्षमता। संस्कृतियों के एंटीजेनिक गुणों का अध्ययन उपयुक्त एंटीसेरा (एग्लूटिनेशन रिएक्शन, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, आदि) के साथ बैक्टीरिया और उनके एंटीजन की बातचीत द्वारा किया जाता है। रूपात्मक और सांस्कृतिक गुणों का अध्ययन करने के बाद, सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृतियों के साथ अंतर परीक्षण किए जाते हैं।

ग्राम-पॉजिटिव कोक्सी। ग्राम-पॉजिटिव कोक्सी परिवार माइक्रोकोकेसी से संबंधित है, जिसमें जीनस माइक्रोकोकस और स्टैफिलोकोकस और परिवार स्ट्रेप्टोकोकेसी शामिल हैं।

परिवार माइक्रोकॉकेसी। मेडिकल माइक्रोबायोलॉजी के लिए, स्टेफिलोकोसी को माइक्रोकॉसी से अलग करना आवश्यक है। वे रूपात्मक गुणों, हेमोलिसिस, नमक के साथ एक माध्यम पर बढ़ने की क्षमता, वर्णक गठन, अवायवीय परिस्थितियों में ग्लूकोज से एसिड में किण्वन, ग्लिसरॉल के किण्वन का अध्ययन करते हैं। माइक्रोकोकी में 2-3 गुना बड़ा कोशिका आकार (0.5-3.5 माइक्रोन) होता है, अवायवीय परिस्थितियों और ग्लिसरॉल के तहत ग्लूकोज को किण्वित नहीं करता है, और पीले से गुलाबी रंग का होता है। विभिन्न प्रकार के स्टेफिलोकोकस का विभेदन परीक्षणों के एक सेट के अनुसार किया जाता है: प्लाज्मा-कोगुलेटिंग क्षमता, लेसिथिनस गतिविधि, एनारोबिक परिस्थितियों में मैनिटोल किण्वन, वर्णक गठन, नोवोबायोसिन के प्रति संवेदनशीलता (परीक्षण सेंट ऑरियस और सेंट एपिडर्मिडिस के लिए सकारात्मक है और सेंट सैप्रोफाइटिकस के लिए नकारात्मक)। स्टेफिलोकोकस को अलग करने के लिए, परीक्षण सामग्री को एक विभेदक निदान माध्यम पर टीका लगाया जाता है: जर्दी-नमक अगर। जब ग्राम द्वारा दाग दिया जाता है, तो स्टेफिलोकोकस ग्राम-पॉजिटिव दाग होता है और अकेले, जोड़े में स्थित होता है, या अनियमित ढेर के रूप में क्लस्टर बनाता है। स्टैफिलोकोकस सोडियम क्लोराइड (7-10%) में उच्च सांद्रता के लिए प्रतिरोधी है, जिसका उपयोग इसे रोग संबंधी सामग्री से अलग करने के लिए किया जाता है। मांस-पेप्टोन शोरबा पर उगने पर, यह एक समान मैलापन का कारण बनता है और एक flocculent अवक्षेप देता है। घने पोषक माध्यम पर, स्टेफिलोकोकस चिकनी किनारों (0.5-1.5 मिमी व्यास) के साथ गोल चमकदार कालोनियों के रूप में बढ़ता है। अध्ययन के दूसरे दिन, विकसित कालोनियों की मात्रात्मक वृद्धि का आकलन किया जाता है, लेसितिण गतिविधि को ध्यान में रखा जाता है, और सूक्ष्म जीव की एक शुद्ध संस्कृति को अलग किया जाता है (दूध या साधारण तिरछी अगर के साथ ट्यूबों में प्रत्यारोपित किया जाता है)। तीसरे दिन - उन्होंने भेदभाव और दवा संवेदनशीलता के लिए परीक्षण किए।

कोगुलेज़ गतिविधि का निर्धारण करते समय, lyophilized खरगोश रक्त प्लाज्मा का उपयोग किया जाता है, बाँझ खारा 1: 5 से पतला होता है और 0.5 मिलीलीटर प्रत्येक के बाँझ ट्यूबों में डाला जाता है। टेस्ट स्ट्रेन के दैनिक अगर कल्चर का 1 लूप एक टेस्ट ट्यूब में लगाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है। परिणाम 30 मिनट, 1 घंटा, 2 घंटे और 24 घंटे के बाद दर्ज किए जाते हैं। एक छोटे से थक्के से प्लाज्मा जमावट की सभी डिग्री जो ट्यूब को उलटने पर गतिहीन रहती है, सकारात्मक मानी जाती है।

लेसितिण गतिविधि जर्दी-नमक अगर पर निर्धारित होती है। प्रतिक्रिया 24-48 घंटों के बाद मैक्रोस्कोपिक रूप से एक बादल क्षेत्र और स्टेफिलोकोकस कॉलोनियों के चारों ओर एक इंद्रधनुषी कोरोला की उपस्थिति से दर्ज की जाती है, जो उनमें लेसिथिनस एंजाइम की उपस्थिति को इंगित करती है।

मैनिटोल के किण्वन का अध्ययन करते समय, टेस्ट स्ट्रेन की दैनिक अगर संस्कृति का टीकाकरण एक कोने के साथ 1% अगर के कॉलम में मैनिटोल और वैसलीन तेल के साथ किया जाता है। मैनिटोल के किण्वन के दौरान, अगर स्तंभ नीला हो जाता है। अगर कॉलम के 2/3 को किण्वित करते समय एक सकारात्मक प्रतिक्रिया पर विचार किया जाता है।

स्टेफिलोकोकस संस्कृतियों के वर्णक गठन को निर्धारित करने के लिए, उन्हें 10% दूध अगर पर टीका लगाया जाता है। 18-20 घंटे में लेखांकन।

स्टैफिलोकोकस की संस्कृति की हेमोलिटिक क्षमता का निर्धारण विकसित कालोनियों के आसपास ज्ञान की उपस्थिति से 5% रक्त अगर (एंटीसेप्टिक के बिना दाता रक्त) पर किया जाता है, जो स्पष्ट रूप से संचरित प्रकाश में पाए जाते हैं। मानव रक्त अगर पर एक सकारात्मक हेमोलिटिक परीक्षण आमतौर पर हेमोटॉक्सिन के कारण होता है, जबकि स्टैफिलोकोकल संक्रमण के रोगजनन में मुख्य भूमिका अल्फा-टॉक्सिन द्वारा निभाई जाती है, जिसे खरगोश के रक्त अगर पर पाया जा सकता है।

परिवार स्ट्रेप्टोकोकासी। स्ट्रेप्टोकोकी सूक्ष्मजीवों का एक बड़ा और बल्कि विषम समूह है। सबसे अधिक अध्ययन किए गए एरोबिक प्रतिनिधि हैं: स्ट्रेप्टोकोकस पाइोजेन्स, एस। फेकलिस, एस। न्यूमोनिया। सूक्ष्म जीव का गोलाकार आकार होता है, ग्राम-पॉजिटिव, घने पोषक माध्यम से स्मीयर में यह 2-3 कोक्सी की छोटी श्रृंखलाओं के रूप में स्थित होता है, तरल पोषक मीडिया पर यह लंबी श्रृंखला देता है। स्ट्रेप्टोकोकी बढ़ते समय, किसी को उनकी बढ़ी हुई आवश्यकता को ध्यान में रखना चाहिए पोषक तत्वओह। इसलिए, स्ट्रेप्टोकोकस की खेती के लिए ग्लूकोज (1%), रक्त (5-10%), सीरम (10-20%) युक्त पोषक माध्यम का उपयोग किया जाता है।

गतिविधि #4

विषय:सूक्ष्मजीवों का शरीर क्रिया विज्ञान। बैक्टीरियोलॉजिकल (सांस्कृतिक) अनुसंधान विधि। सूक्ष्मजीवों के जैव रासायनिक गुण।

जांच सूची

जीवाणुओं का पोषण। पोषक तत्व कार्बन और नाइट्रोजन के स्रोत हैं। पोषण के प्रकार द्वारा जीवाणुओं का वर्गीकरण स्वपोषी और रसायन-ऑर्गनोट्रोफ्स

वृद्धि कारक और उनके स्रोत। खनिज तत्वों के स्रोत।

झिल्ली के माध्यम से पोषक तत्वों के हस्तांतरण के तरीके और तंत्र।

बैक्टीरिया की ऊर्जा आवश्यकताएं। स्वपोषी (प्रकाश संश्लेषण, रसायनसंश्लेषण) में ऊर्जा प्राप्त करने के तरीके। कीमोऑर्गनोट्रोफ्स में ऊर्जा प्राप्त करने के स्रोत और तरीके।

जीवाणुओं में एरोबिक और अवायवीय प्रकार के जैविक ऑक्सीकरण। एरोबिक, एनारोबिक, फैकल्टी एनारोबिक और माइक्रोएरोफिलिक बैक्टीरिया। अवायवीय स्थिति बनाने के तरीके।

बैक्टीरियोलॉजिकल (सांस्कृतिक) अनुसंधान पद्धति के कार्य, चरण, फायदे और नुकसान।

सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और प्रजनन। प्रजनन के तरीके। बाइनरी (सरल) विखंडन, तंत्र। जीवाणु आबादी का प्रजनन।

जीवाणुओं की खेती के सिद्धांत और तरीके। रोगाणुओं की पोषण संबंधी आवश्यकताएं।

जीवाणुओं की खेती के लिए पोषक माध्यम। पोषक तत्वों की आवश्यकताएं। पोषक माध्यम का वर्गीकरण।

बैक्टीरिया पैदा करने की शर्तें और तकनीकें। पोषक माध्यम पर बुवाई की तकनीक। घने और तरल पोषक माध्यम पर जीवाणु वृद्धि की नियमितता और चरित्र।

एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने के तरीके।

पृथक संस्कृतियों की पहचान करने के लिए प्रयुक्त गुण।

स्वतंत्र और प्रयोगशाला कार्य

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि(चरण):

1 पहला चरणएरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृति का अलगाव: ए) रोग संबंधी सामग्री की माइक्रोस्कोपी।

पैथोलॉजिकल सामग्री से स्मीयरों का ग्राम धुंधला हो जाना। ड्रग स्केच।

पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए लैमेलर मीट-पेप्टोन अगर (एमपीए) पर बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ रोग संबंधी सामग्री का टीकाकरण।

संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण(आवेदन के क्षेत्र निर्दिष्ट करें)

1. संगति से:तरल (मांस-पेप्टोन शोरबा, पित्त, चीनी शोरबा), घना (2-3% अगर) और अर्ध-तरल (0.15-0.7% अगर) मीडिया।

2. मूल से:प्राकृतिक - दूध, मांस से। अंडे, आलू, मानव रक्त सीरम, पशु और अन्य उत्पाद; कृत्रिम - 1) सूक्ष्मजीवों के विकास और प्रजनन के लिए आवश्यक सांद्रता और संयोजनों में पोषक तत्वों का प्राकृतिक संतुलित मिश्रण, नाइट्रोजन और कार्बन का एक सार्वभौमिक स्रोत - पेप्टोन - पेप्सिन या विभिन्न हाइड्रोलिसेट्स (मछली, कैसिइन, खमीर, आदि) का उपयोग करके प्रोटीन के अधूरे टूटने के उत्पाद। 2) कृत्रिम सीशुद्ध रासायनिक संरचनामाइकोबैक्टीरिया के लिए सोटन, कोशिकाओं के लिए 199।

3. रचना में: सरल संस्कृति मीडिया (मांस-पेप्टोन शोरबा-एमपीबी, मांस-पेप्टोन अगर-एमपीए) और साथ झूठा (केए = एमपीए + 5-10% पशु रक्त)

4. मिलने का समय निश्चित करने पर:

लेकिन) सामान्य उद्देश्य - सार्वभौमिक, किसी भी सूक्ष्मजीव की खेती के लिए अभिप्रेत है (एमपीए, केए)

बी ) विशेषबढ़ते सूक्ष्मजीवों के लिए जो सार्वभौमिक मीडिया पर नहीं उगते हैं, प्रजातियों का भेदभाव और कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों का चयनात्मक अलगाव:

वैकल्पिक (चयनात्मक) कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों को अलग करने और संबंधित लोगों के विकास को दबाने के लिए - (स्टैफिलोकोसी के लिए नमक अगर)।

विभेदक निदान (डीडीएस)-वातावरण जो एंजाइमी गतिविधि द्वारा बैक्टीरिया के प्रकारों के बीच अंतर करना संभव बनाता है; वे साथ अधिकारी: 1) सार्वभौमिक पोषक माध्यम (एमपीए, केए); 2) विभेदक कारक - एक रासायनिक सब्सट्रेट (उदाहरण के लिए, कार्बोहाइड्रेट), एक अलग संबंध जो किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए एक नैदानिक ​​​​विशेषता है। 3) एक संकेतक जिसका रंग परिवर्तन जैव रासायनिक प्रतिक्रिया को इंगित करता है। (Endo, Ploskirev, Giss और अन्य के वातावरण)।

विभेदक चयनात्मक (डीएस) - वातावरण जो अनुमति देते हैं आवंटित एक निश्चित प्रजाति के बैक्टीरिया अपनी शारीरिक विशेषताओं के अनुसार और अन्य प्रजातियों से अलग-अलग होते हैं एंजाइमी गतिविधि उनमें शामिल हैं: 1) एमपीए 2) वैकल्पिक एक रासायनिक सब्सट्रेट जो अन्य प्रकार के जीवाणुओं के विकास को रोकता है . 3) विभेदक कारक - सब्सट्रेट जिसके लिए इस सूक्ष्म जीव के लिए एक नैदानिक ​​विशेषता है;) 4.) एक संकेतक जिसका रंग परिवर्तन जैव रासायनिक प्रतिक्रिया को इंगित करता है। (स्टेफिलोकोसी के लिए बुधवार, साल्मोनेला के लिए आईसीए, शिगेला और साल्मोनेला के लिए प्लॉस्किरेव)।

बी) संवर्धन नैदानिक ​​​​सामग्री में एक निश्चित प्रकार के बैक्टीरिया के प्रजनन और संचय के लिए मीडिया (20% पित्त शोरबा में रक्त = साल्मोनेला, 10% सीरम में गले का निर्वहन + 2% टेल्यूराइट = कोरिनेबैक्टीरिया।)

डी) परिवहन क्लिनिकल सामग्री के संग्रह और वितरण (संरक्षण) के लिए माध्यम = 48 घंटे (एमीज़ माध्यम - अर्ध-तरल अगर + सक्रिय चारकोल)।)

पोषक मीडिया(उदाहरण):

बुधवार एंडो मध्यम प्रकार एंटरोबैक्टीरिया के लिए विभेदक निदान पोषक तत्व आधार एमपीए विभेदक कारक लैक्टोज 1% सूचक मूल फुकसिन को सोडियम सल्फाइट से रंगहीन किया गया। ई.एस.ओ ओलि लैक्टोज को एसिड में विघटित करें - कॉलोनियां एक धात्विक चमक के साथ लाल होती हैं, रोगजनक रंगहीन होती हैं;

नमक अगर मध्यम प्रकार स्टेफिलोकोसी के अलगाव के लिए चयनात्मक पोषक तत्व आधार एमपीए वैकल्पिक कारक सोडियम क्लोराइड 10%

बुधवार प्लोस्किरेव मध्यम प्रकार विभेदक चयनात्मकएंटरोबैक्टीरिया के लिए

पोषक तत्व आधार एमपीए वैकल्पिक कारक पित्त लवण विभेदक कारक लैक्टोज

सूचक तटस्थ लाल

जर्दी-नमक अगर मध्यम प्रकार के लिए विभेदक चयनात्मक एस . ऑरियस _

पोषक तत्व आधार एमपीएवैकल्पिक कारक सोडियम क्लोराइड 10%

विभेदक कारक अंडे की जर्दी

सूचक नहीं

2 चरण 2जीवाणु अनुसंधान विधि (शुद्ध संस्कृति का अलगाव):

ए) लैमेलर एमपीए पर पृथक कालोनियों (एसचेरीचिया, स्टेफिलोकोकस) का अध्ययन।

बी) चयनित कॉलोनियों (ग्राम दाग) से स्मीयर तैयार करना।

सी) शुद्ध संस्कृति के संचय के लिए पृथक कॉलोनियों को तिरछी एमपीए में स्थानांतरित करना।

3 अवायवीय जीवाणुओं की एक शुद्ध संस्कृति का अलगाव: रोगजनक क्लोस्ट्रीडिया को अलग करने के लिए किट्टा-तारोज़ी माध्यम पर मिट्टी के निलंबन का टीकाकरण

Kitt-Tarozzi माध्यम में पोषक तत्व शोरबा, 0.5% ग्लूकोज, और माध्यम से ऑक्सीजन को अवशोषित करने के लिए यकृत या कीमा बनाया हुआ मांस के टुकड़े होते हैं। बुवाई से पहले, माध्यम से हवा निकालने के लिए माध्यम को उबलते पानी के स्नान में 20-30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बुवाई के बाद पोषक माध्यम तुरंत एक परत से भर जाता है तेल

एनारोबायोसिस बनाने के तरीके:

1.शारीरिक- हवा को पंप करना, एक विशेष ऑक्सीजन मुक्त गैस मिश्रण (आमतौर पर एन .) पेश करना 2 - 85% सीओ 2 - 10%, एच 2 - 5%), कल्चर मीडिया का प्रारंभिक उबलना, अगर के एक गहरे स्तंभ में टीकाकरण, ऑक्सीजन की पहुंच को कम करने के लिए मीडिया को वैसलीन तेल से भरना, एक अक्रिय गैस के साथ भली भांति बंद शीशियों और टेस्ट ट्यूब, सीरिंज और प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ का उपयोग, जलती हुई मोमबत्ती के साथ कसकर बंद desiccators का उपयोग

2. रसायन रासायनिक ऑक्सीजन मैला ढोने वालों का उपयोग किया जाता है।

3. जैविक - सख्त एरोबेस और एनारोबेस की संयुक्त खेती (एरोबेस ऑक्सीजन को अवशोषित करते हैं और एनारोबेस के प्रजनन के लिए स्थितियां बनाते हैं - फोर्टनर विधि)।

बुधवार किट - तारोज़्ज़िक पर्यावरण से ऑक्सीजन को अवशोषित करने के लिए पोषक तत्व शोरबा, 0.5% ग्लूकोज और यकृत या कीमा बनाया हुआ मांस के टुकड़े होते हैं। बुवाई से पहले, माध्यम से हवा निकालने के लिए माध्यम को उबलते पानी के स्नान में 20-30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बुवाई के बाद पोषक माध्यम तुरंत एक परत से भर जाता हैतेल या वैसलीन तेल ऑक्सीजन की पहुंच से अलग करने के लिए।

4. मिश्रित - कई अलग-अलग तरीकों का इस्तेमाल करें।

एनारोबिक स्थितियां बनाने के लिए विशेष उपकरणों का उपयोग किया जाता है - एनारोस्टैट्स। एनारोबिक और माइक्रोएरोफिलिक स्थितियां बनाने के लिए वर्तमान में सबसे सरल और सबसे कुशल उपकरण एक रासायनिक विधि है वायुमंडलीय ऑक्सीजन को भली भांति बंद करके सील किए गए कंटेनरों में अवशोषित करने के सिद्धांत पर कार्य करने वाले विशेष बैग के साथ .

विल्सन-ब्लेयर माध्यम (ट्यूब, कप):

पोषक तत्व आधार एमपीए श्वसन सब्सट्रेट शर्करा

कम करने वाला कारक सोडियम सल्फाइट और फेरिक क्लोराइड सोडियम सल्फाइटना 2 इसलिए 3 → ना 2 एस

विल्सन-ब्लेयर पर्यावरण के लिए, आधार है अगर अतिरिक्त के साथ शर्करा , क्लोस्ट्रीडिया इस माध्यम पर फार्म कालोनियों बहाली के कारण काला रंग सल्फाइट इससे पहले सल्फाइड - ऋणायन , जो से जुड़ा है फैटायनों ग्रंथि (II) काला नमक देता है। इस शिक्षा माध्यम पर आमतौर पर काला कालोनियों , अग्र स्तंभ की गहराई में दिखाई दें .

थियोग्लाइकॉल माध्यम (बाँझपन नियंत्रण के लिए माध्यम): (ट्यूब):

पोषक तत्व आधार बीसीएच श्वसन सब्सट्रेट शर्करा कम करने वाला कारक सोडियम थायोग्लाइकोलेट

सूचक रेसज़ुरिन

ज़ीस्लर रक्त ग्लूकोज अगर: (कप): पोषक तत्व आधार एमपीए, रक्त

श्वसन सब्सट्रेट शर्करा कम करने वाला कारक हीमोग्लोबिन

शब्द "एनारोबेस" पेश किया गया थालुई पास्चरजिसने 1861 में खोजा थाजीवाणुब्यूटिरिक किण्वन.

लेकिनव्याख्यान 3 सूक्ष्मजीवों का शरीर विज्ञान। बैक्टीरिया का चयापचय .

सूक्ष्मजीवों के शरीर विज्ञान में शामिल हैं :

भोजन के प्रकार;

श्वास के प्रकार;

खेती (स्थितियां, वातावरण, चरित्र और विकास दर);

जैव रासायनिक गतिविधि;

परिवर्तनशीलता;

जैविक रूप से अलगाव सक्रिय पदार्थ, विषाक्त पदार्थों और अन्य रोगजनकता कारक;

एंटीबायोटिक दवाओं, बैक्टीरियोफेज, बैक्टीरियोसिन के प्रति संवेदनशीलता;

अन्य जैविक गुण।

बैक्टीरिया का चयापचय - भौतिक और रासायनिक प्रक्रियाओं (रासायनिक परिवर्तन और प्रतिक्रियाओं) का एक सेट जिसका उद्देश्य संरचनाओं को पुन: उत्पन्न करना और एक माइक्रोबियल सेल के महत्वपूर्ण कार्यों को सुनिश्चित करना है, जैसे:

वृद्धि और प्रजनन;

आरक्षित खाद्य सामग्री का जमाव;

माइक्रोबियल सेल में पोषक तत्वों का परिवहन;

चयापचय उत्पादों (विषाक्त पदार्थों, एंजाइम, एंटीबायोटिक्स और अन्य जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ) की रिहाई;

गति;

बीजाणु गठन;

मेजबान कोशिकाओं के संवेदनशील रिसेप्टर्स पर आसंजन और उनमें प्रवेश;

बाहरी वातावरण में परिवर्तन के लिए विभिन्न अनुकूली प्रतिक्रियाएं।

उपचय- जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं का एक सेट जो सेल घटकों के संश्लेषण को अंजाम देता है।

अपचय- प्रतिक्रियाओं का एक सेट जो कोशिका को ऊर्जा प्रदान करता है।

चयापचय अध्ययन योजना - चरण:

1. प्रारंभिक (परिधीय) चयापचय - बाहर से कोशिका में पदार्थों का प्रवेश और मध्यवर्ती उत्पादों में क्षय।

2. एम्फीबोलिज्म (मध्यवर्ती चयापचय) - मध्यवर्ती चयापचय उत्पादों का गठन जो कैटोबोलिक और एनाबॉलिक मार्गों के लिए सामान्य है।

3. रचनात्मक चयापचय (कोशिका संरचनाओं के निर्माण के लिए नेतृत्व) और ऊर्जा चयापचय (एटीपी गठन) के अंतिम, कड़ाई से विशिष्ट चरण।

कोशिका में पोषक तत्वों के प्रवेश के लिए तंत्र:

सरल प्रसार (सच्चे समाधान के लिए)। ऊर्जा स्वतंत्र प्रक्रिया।

सुगम प्रसार ("स्टीम डाउनस्ट्रीम") - वाहक प्रोटीन की भागीदारी के साथ एकाग्रता ढाल की दिशा में। ऊर्जा निर्भर प्रक्रिया।

सक्रिय परिवहन परमिट (एमिनो-, हाइड्रॉक्सी-एसिड, आयनिक, आदि) की भागीदारी के साथ एकाग्रता और विद्युत रासायनिक ढाल के खिलाफ है। प्रक्रिया एटीपी ऊर्जा के व्यय के साथ चलती है, पदार्थों के प्रभार और स्थानांतरण की प्रक्रिया में उनके परिवर्तन पर निर्भर करती है।

कार्बन स्रोतों को अवशोषित करने की उनकी क्षमता के अनुसार सूक्ष्मजीवों को दो समूहों में विभाजित किया जाता है: स्वपोषी (अव्य। ऑटो - खुद, ट्रॉफी - पोषण) सीओ 2 से कोशिका के सभी कार्बन युक्त घटकों को कार्बन और हेटरोट्रॉफ़्स के एकमात्र स्रोत के रूप में संश्लेषित करते हैं (lat। हेटेरोस - दूसरा, "दूसरों की कीमत पर भोजन") विभिन्न प्रकार के कार्बनिक कार्बन युक्त यौगिकों का उपयोग करता है।

ऊर्जा स्रोतों के आधार पर, सूक्ष्मजीवों को फोटोट्रॉफ़्स (प्रकाश संश्लेषक) में भी विभाजित किया जाता है, जो सौर ऊर्जा का उपयोग करने में सक्षम होते हैं, और केमोट्रोफ़्स (रसायन संश्लेषक), रेडॉक्स प्रतिक्रियाओं के माध्यम से ऊर्जा प्राप्त करते हैं।

उपयोग किए गए इलेक्ट्रॉन दाताओं के आधार पर, बैक्टीरिया को लिथोट्रॉफ़ (अकार्बनिक इलेक्ट्रॉन दाताओं का उपयोग करके) और ऑर्गनोट्रोफ़ (कार्बनिक यौगिकों का उपयोग करके) में विभाजित किया जाता है।

प्रोटोट्रॉफ़्स- ग्लूकोज और अमोनियम लवण से आवश्यक सभी कार्बनिक यौगिकों को संश्लेषित करने में सक्षम सूक्ष्मजीव।

औक्सोट्रॉफ़्स- सूक्ष्मजीव किसी भी कार्बनिक यौगिक को संश्लेषित करने में असमर्थ होते हैं। वे इन यौगिकों को पर्यावरण या मानव शरीर से तैयार रूप में प्राप्त करते हैं।

एंजाइमों(ग्रीक से। fermentum-sourdough) - सभी जीवित कोशिकाओं में मौजूद अत्यधिक विशिष्ट प्रोटीन उत्प्रेरक, जिसके बिना जीवन और प्रजनन संभव नहीं है। एंजाइम अपने संबंधित मेटाबोलाइट्स (सब्सट्रेट) को पहचानते हैं, उनके साथ बातचीत करते हैं और रासायनिक प्रतिक्रियाओं को तेज करते हैं। एंजाइम प्रोटीन होते हैं।

एक सूक्ष्मजीव की एंजाइम संरचना जीनोम द्वारा निर्धारित की जाती है और यह काफी स्थिर विशेषता है। बैक्टीरिया की जैव रासायनिक पहचान के लिए एंजाइमों का निर्धारण व्यापक रूप से किया जाता है।

एंडोएंजाइम कोशिका के भीतर चयापचय को उत्प्रेरित करते हैं।

एक्सोएंजाइम कोशिका द्वारा पर्यावरण में स्रावित होते हैं।

विधानएंजाइम लगातार कुछ सांद्रता में संश्लेषित होते हैं।

प्रेरकएंजाइम एंजाइम होते हैं जिनकी सांद्रता संबंधित सब्सट्रेट के सेवन से बढ़ जाती है।

आक्रामकता के एंजाइम:हयालूरोनिडेस, फाइब्रिनोलिसिन, न्यूरोमिनिडेज़, कोलेजनेज़, लेसिथिनेज़ (लिसिटोविटेलेज़), कोगुलेज़, यूरेज़, अमीनो एसिड डिकार्बोक्सिलेस, डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़।

खेती करना- एक कृत्रिम पोषक माध्यम में सूक्ष्मजीवों की संस्कृतियों को प्राप्त करना।

खेती के लक्ष्य:

रोगजनक सूक्ष्मजीवों और उनकी पहचान की शुद्ध संस्कृतियों को प्राप्त करना;

बीएएस उत्पादकों (विटामिन, हार्मोन, अमीनो एसिड, एंटीबायोटिक्स, आदि) के बायोमास का संचय;

नैदानिक ​​​​और रोगनिरोधी तैयारी (टीके, निदान) प्राप्त करना;

संदर्भ संग्रहालय संस्कृतियों का भंडारण;

सैनिटरी माइक्रोबायोलॉजी में सैनिटरी संकेतक सूक्ष्मजीवों का निर्धारण करने के लिए - पर्यावरण प्रदूषण के संकेतक।

संस्कृति- पोषक माध्यम पर उगने वाले सूक्ष्मजीवों की आबादी।

शुद्ध संस्कृति- पोषक माध्यम पर एक अलग कॉलोनी से उगाए गए एक प्रकार के सूक्ष्मजीवों की आबादी।

अधिकांश रोगजनक रोगाणुओं को पोषक माध्यम पर 37 डिग्री सेल्सियस पर 1-2 दिनों के लिए उगाया जाता है।

संस्कृति मीडिया का वर्गीकरण

संगति से:तरल, अर्ध-तरल, घना।

मूल:प्राकृतिक (दूध, आलू), कृत्रिम, अर्ध-सिंथेटिक, सिंथेटिक

रचना में:सरल (एमपीए, एमपीबी, सब्जियां, दूध), जटिल (1% ग्लूकोज, 10-20% सीरम, 20-30% जलोदर द्रव, 5-10% डिफिब्रिनेटेड रक्त)।

मिलने का समय निश्चित करने पर:

यूनिवर्सल - मीडिया जिस पर कई तरह के बैक्टीरिया अच्छी तरह पनपते हैं। इनमें मीट-पेप्टोन ब्रोथ (एमपीबी) और मीट-पेप्टोन एगर (एमपीए) शामिल हैं;

विशेष - मीडिया विशेष रूप से बैक्टीरिया के विकास को प्राप्त करने के लिए तैयार है जो सार्वभौमिक मीडिया पर नहीं बढ़ते हैं;

विभेदक निदान - वातावरण जो एंजाइमी गतिविधि द्वारा एक प्रकार के बैक्टीरिया को दूसरों से अलग करना संभव बनाता है;

चयनात्मक - मीडिया जिसमें कुछ प्रजातियों के सूक्ष्मजीवों द्वारा उपयोग किए जाने वाले पदार्थ होते हैं और अन्य सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं। चयनात्मक मीडिया आपको अध्ययन के तहत सामग्री से कुछ प्रकार के बैक्टीरिया का चयन करने की अनुमति देता है;

विभेदक-चयनात्मक - ऐसे वातावरण जो विभेदक निदान और चयनात्मक वातावरण के गुणों को जोड़ते हैं;

परिरक्षक;

एकाग्र करना।

तरल और घने पोषक माध्यम पर बैक्टीरिया का प्रजनन।

विकास एक जीवाणु कोशिका के सभी घटकों का समन्वित प्रजनन और इसके बायोमास में वृद्धि। प्रजनन- प्रजनन और कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि, जिससे जीवाणु आबादी का निर्माण होता है।

बैक्टीरिया को प्रजनन की उच्च दर की विशेषता है। प्रजनन दर प्रजातियों, पोषक माध्यम की संरचना, पीएच, तापमान और वातन पर निर्भर करती है।

घने पोषक माध्यम पर, बैक्टीरिया कॉलोनियों नामक कोशिकाओं के समूह बनाते हैं। कालोनियों विभिन्न प्रकारआकार, आकार, स्थिरता, रंग, किनारों की प्रकृति, सतह की प्रकृति, पारदर्शिता में भिन्न।

तरल पोषक माध्यम पर विकास की प्रकृति: फिल्मी (पोषक माध्यम की सतह पर एक फिल्म का निर्माण), फैलाना मैलापन, निकट-नीचे (वर्षा)।

जीवाणु आबादी के विकास के चरण

प्रारंभिक स्थिर चरण (~ 1-2 घंटे)। बैक्टीरिया की संख्या नहीं बढ़ती है, कोशिकाएं नहीं बढ़ती हैं।

अंतराल चरण या प्रजनन विलंब चरण (~ 2 घंटे)।

लॉग-चरण - लघुगणक या घातीय चरण (~ 3-5h)। आबादी बंटी हुई है अधिकतम गतिऔर व्यक्तियों में तेजी से वृद्धि हुई है।

नकारात्मक त्वरण का चरण (~ 2 घंटे)। सीमित मेटाबोलाइट की कमी या विषाक्त चयापचय उत्पादों के संचय के साथ संबद्ध।

अधिकतम का स्थिर चरण। बनने और मरने वाली कोशिकाओं की संख्या समान होती है।

त्वरित मृत्यु का चरण (~ 3 घंटे)।

लघुगणक मृत्यु चरण (~5)।

मृत्यु दर घटने का चरण - शेष जीवित व्यक्ति सुप्त अवस्था में चले जाते हैं।

बैक्टीरिया का ऊर्जा चयापचय

एरोबिक्स- सूक्ष्मजीव जो सब्सट्रेट के एरोबिक (ऑक्सीडेटिव) प्रकार के जैविक ऑक्सीकरण का उपयोग करते हैं। एरोबेस का चयापचय केवल आवास में मुक्त ऑक्सीजन की उच्च सांद्रता की उपस्थिति में किया जाता है, जो सब्सट्रेट से लिए गए इलेक्ट्रॉनों के अंतिम स्वीकर्ता के रूप में कार्य करता है। वायुमंडलीय ऑक्सीजन की पूर्ण पहुंच के साथ मीडिया पर एरोबेस की खेती की जाती है।

बाध्य अवायवीय- अवायवीय प्रकार के जैविक ऑक्सीकरण (किण्वन) का उपयोग करने वाले सूक्ष्मजीव। चयापचय केवल ऑक्सीजन की अनुपस्थिति में कम रेडॉक्स क्षमता वाले वातावरण में होता है।

पर्यावरण में ऑक्सीजन की मात्रा में वृद्धि से वानस्पतिक रूपों की मृत्यु हो जाती है।

किण्वन के दौरान निकाली गई ऊर्जा की मात्रा कम होती है, इसलिए बाध्यकारी अवायवीय जीवों को बड़ी मात्रा में सब्सट्रेट को किण्वित करने के लिए मजबूर किया जाता है।

एछिक अवायुजीव- जैविक ऑक्सीकरण के एरोबिक (ऑक्सीडेटिव) और एनारोबिक (किण्वक) मार्गों द्वारा सब्सट्रेट से ऊर्जा निकालने में सक्षम सूक्ष्मजीव। पर्यावरण के लिए ऑक्सीजन की पूर्ण पहुंच की शर्तों के तहत और एनारोबायोसिस की स्थितियों के तहत चयापचय किया जा सकता है।

अवायवीयता पैदा करने के तरीके

शारीरिक

चीनी एमपीए के एक कॉलम में बुवाई;

तरल पोषक माध्यम का उबलना (पुनर्जनन) जिसके बाद तेल का लेप होता है;

एनारोस्टैट्स में ऑक्सीजन का यांत्रिक निष्कासन;

एक उदासीन गैस द्वारा ऑक्सीजन का प्रतिस्थापन;

वीलन-विग्नल ट्यूब।

रासायनिक

अरिस्टोव्स्की का तंत्र;

ओमेलेंस्की की मोमबत्ती (पाइरोगॉल का क्षारीय घोल);

रासायनिक ऑक्सीजन स्वीकर्ता का उपयोग: ग्लूकोज, पाइरुविक एसिड, सोडियम फॉर्मिक एसिड, आदि।

जैविक

किट्टा-तरोज़ी बुधवार

फ़ोर्टनर विधि

अवायवीय - जीव जो पहुंच के अभाव में ऊर्जा प्राप्त करते हैं ऑक्सीजन सब्सट्रेट द्वारा फास्फारिलीकरण सब्सट्रेट के अधूरे ऑक्सीकरण के अंतिम उत्पादों को अधिक ऊर्जा के साथ ऑक्सीकरण किया जा सकता हैएटीपी जीवों द्वारा एक टर्मिनल प्रोटॉन स्वीकर्ता की उपस्थिति में .

अवायुश्वसन- सकल जैव रासायनिक प्रतिक्रियाएं, जीवित जीवों की कोशिकाओं में होने वाले अंतिम प्रोटॉन स्वीकर्ता के रूप में उपयोग नहीं किया जाता है ऑक्सीजन, और अन्य पदार्थ (उदाहरण के लिए, नाइट्रेट) और प्रक्रियाओं को संदर्भित करता है ऊर्जा उपापचय(अपचय,भेद), जो विशेषता हैं ऑक्सीकरणकार्बोहाइड्रेट,लिपिडऔर अमीनो अम्लकम आणविक भार यौगिकों के लिए।

लेकिन एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया को प्रारंभिक रूप से तरल पोषक माध्यम में O2 सांद्रता प्रवणता द्वारा पहचाना जाता है:

1. एरोबिक को बाध्य करें(ऑक्सीजन की मांग करने वाले) बैक्टीरिया मुख्य रूप से ऑक्सीजन की अधिकतम मात्रा को अवशोषित करने के लिए ट्यूब के शीर्ष पर इकट्ठा होते हैं। (अपवाद: माइकोबैक्टीरिया - मोम-लिपिड झिल्ली के कारण सतह पर फिल्म की वृद्धि।)

2. बाध्य अवायवीयबैक्टीरिया ऑक्सीजन से बचने (या बढ़ने नहीं) के लिए तल पर इकट्ठा होते हैं। 3. वैकल्पिक बैक्टीरियामुख्य रूप से ऊपरी ( ऑक्सीडेटिव फाृॉस्फॉरिलेशनग्लाइकोलाइसिस की तुलना में अधिक फायदेमंद है), हालांकि, वे पूरे माध्यम में पाए जा सकते हैं, क्योंकि वे ओ 2 पर निर्भर नहीं होते हैं। 4 . माइक्रोएरोफाइलट्यूब के ऊपरी भाग में एकत्र किए जाते हैं, लेकिन उनका इष्टतम ऑक्सीजन की कम सांद्रता है। पांच। एरोटोलेरेंटअवायवीय ऑक्सीजन सांद्रता पर प्रतिक्रिया नहीं करते हैं और समान रूप से पूरे टेस्ट ट्यूब में वितरित किए जाते हैं।

डी माप के लिए क्षमतावातावरण एम. क्लार्क pH20 मान का उपयोग करने का प्रस्ताव - ऋणात्मक लोगारित्मआंशिक दबावगैसीय हाइड्रोजन. रेंज संतृप्ति के सभी डिग्री की विशेषता है जलीय घोलहाइड्रोजन और ऑक्सीजन। एरोबिक्स एक उच्च क्षमता पर विकसित होते हैं, वैकल्पिक अवायवीय, और सबसे कम लोगों को बाध्य करते हैं।)

अवायवीय का वर्गीकरण, अंतर करना:

एछिक अवायुजीव

Capneistic anaerobes और microaerophiles

एरोटोलरेंट एनारोबेस

मध्यम सख्त अवायवीय

अवायवीय को बाध्य करना

यदि कोई जीव एक उपापचयी मार्ग से दूसरे उपापचयी मार्ग में जाने में सक्षम है (उदाहरण के लिए, अवायवीय श्वसन से एरोबिकऔर इसके विपरीत), तो इसे सशर्त रूप से ऐच्छिक अवायवीय के रूप में जाना जाता है .

1991 तक, माइक्रोबायोलॉजी में कैपनेस्टिक एनारोबेस के एक वर्ग को प्रतिष्ठित किया गया था, जिसके लिए कम एकाग्रता की आवश्यकता होती है ऑक्सीजनऔर कार्बन डाइऑक्साइड की बढ़ी हुई सांद्रता (ब्रूसेला गोजातीय प्रकार - बी। गर्भपात)

बैक्टीरियोलॉजिकल विधि का उपयोग रोगी से प्राप्त सामग्री से शुद्ध संस्कृति में रोगज़नक़ को अलग करना और गुणों के एक परिसर के अध्ययन के आधार पर इसकी पहचान करना संभव बनाता है। अधिकांश जीवाणु विभिन्न कृत्रिम पोषक माध्यमों (क्लैमाइडिया और रिकेट्सिया को छोड़कर) पर खेती करने में सक्षम हैं, इसलिए कई संक्रामक रोगों के निदान में बैक्टीरियोलॉजिकल विधि महत्वपूर्ण है।

यदि एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो बैक्टीरियोलॉजिकल विधि रोगाणुरोधी दवाओं के लिए पृथक रोगज़नक़ की संवेदनशीलता को निर्धारित करना संभव बनाती है। हालांकि, इस अध्ययन की प्रभावशीलता कई मापदंडों पर निर्भर करती है, विशेष रूप से संग्रह की स्थितिऔर उसके परिवहनप्रयोगशाला को।

प्रति बुनियादी आवश्यकताएंबैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए सामग्री के चयन और परिवहन के लिए आवश्यकताओं में शामिल हैं:

• एटियोट्रोपिक उपचार की शुरुआत से पहले सामग्री लेना;
• सामग्री एकत्र करते समय बाँझपन की स्थिति का पालन;
• सामग्री संग्रह की तकनीकी शुद्धता;
• पर्याप्त मात्रा में सामग्री;
• सामग्री के भंडारण और परिवहन के तापमान शासन को सुनिश्चित करना;
• सामग्री के संग्रह और घने पोषक माध्यम पर बुवाई के बीच न्यूनतम समय अंतराल में कमी।

प्रयोगशाला में सामग्री का परिवहन जल्द से जल्द किया जाना चाहिए, लेकिन इसे लेने के 1-2 घंटे के भीतर नहीं। सामग्री के नमूने एक निश्चित तापमान पर होने चाहिए; विशेष रूप से, सामान्य रूप से बाँझ सामग्री (रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव) को संग्रहीत किया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है। गैर-बाँझ सामग्री (मूत्र, श्वसन स्राव, आदि) कमरे के तापमान पर 1-2 घंटे से अधिक या 4 डिग्री सेल्सियस (घरेलू रेफ्रिजरेटर की स्थिति) पर एक दिन से अधिक नहीं संग्रहीत की जाती है। यदि निर्धारित समय सीमा के भीतर नमूनों को प्रयोगशाला में पहुंचाना असंभव है, तो संरक्षण स्थितियों के तहत रोगजनकों की व्यवहार्यता को संरक्षित करने के लिए डिज़ाइन किए गए परिवहन मीडिया का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

अनुसंधान के लिए रक्तबुखार की शुरुआत में, शरीर के तापमान में वृद्धि के दौरान रोगी से लिया जाना चाहिए। 4-6 घंटे के अंतराल के साथ लिए गए 3-4 रक्त नमूनों की जांच करने की सिफारिश की जाती है, जो कि "लापता" क्षणिक बैक्टेरिमिया के जोखिम को कम करने और अवसरवादी माइक्रोफ्लोरा की एटियलॉजिकल भूमिका की पुष्टि करने की क्षमता को बढ़ाने के मामले में उचित है। रक्त यदि यह माइक्रोफ्लोरा शिरापरक रक्त के कई नमूनों में पाया जाता है। एक वयस्क में 10 मिली और बच्चों में 5 मिली की मात्रा में रक्त का नमूना 1:10 के अनुपात में एरोबिक और एनारोबिक सूक्ष्मजीवों के लिए एक माध्यम के साथ कम से कम दो शीशियों में लगाया जाता है। धमनी रक्त का एक अध्ययन भी वांछनीय है।

लेना मस्तिष्कमेरु द्रव(सीएसजे) एक डॉक्टर द्वारा एक सूखी बाँझ ट्यूब में 1-2 मिलीलीटर की मात्रा में काठ का पंचर के साथ निर्मित किया जाता है। नमूना तुरंत प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है, जहां इसका अध्ययन भी तुरंत शुरू हो जाता है। यदि यह संभव नहीं है, तो सामग्री को कई घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। ग्लूकोज के साथ एक अर्ध-तरल माध्यम वाली टेस्ट ट्यूब में और "रक्त" अगर के साथ पेट्री डिश में सीएसएफ की 1-2 बूंदों को बोने से बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के सकारात्मक परिणामों की संख्या में उल्लेखनीय वृद्धि होती है। सामग्री भेजने के लिए, इज़ोटेर्मल बॉक्स, हीटिंग पैड, थर्मोज़ या कोई अन्य पैकेजिंग जहां तापमान लगभग 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाता है, का उपयोग किया जाता है।

मलमूत्रबैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के लिए, उन्हें एक कसकर बंद ढक्कन के साथ एक बाँझ बर्तन में 3-5 ग्राम की मात्रा में बाँझ लकड़ी के स्थानिक के साथ लिया जाता है। ली गई सामग्री का अध्ययन 2 घंटे बाद शुरू नहीं किया जाना चाहिए। यदि इस समय के दौरान अध्ययन शुरू करना संभव नहीं है, तो थोड़ी मात्रा में सामग्री ली जानी चाहिए और उचित परिवहन माध्यम में रखा जाना चाहिए। मल का चयन करते समय, सामग्री में जीवाणुनाशक गुणों के साथ रक्त अशुद्धियों के प्रवेश से बचने के लिए, अनुसंधान के लिए रोग संबंधी अशुद्धियों (बलगम, मवाद, उपकला कण, आदि) को भेजने का प्रयास करना चाहिए।

सामग्री लेने के लिए, रेक्टल स्वैब (एक कपास की नोक के साथ) का उपयोग किया जा सकता है। स्वाब को बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान या परिवहन माध्यम (तेल जेल नहीं) के साथ सिक्त किया जाना चाहिए। इसे प्रति मलाशय में 5-6 सेमी की गहराई तक पेश किया जाता है और टैम्पोन को मोड़ते हुए, टैम्पोन पर फेकल रंग की उपस्थिति को नियंत्रित करते हुए, इसे ध्यान से हटा दें। यदि सामग्री का अध्ययन 2 घंटे के भीतर शुरू हो जाता है, तो स्वाब को एक सूखी परखनली में रखा जाता है, अन्यथा - परिवहन माध्यम में।

मूत्र(स्वतंत्र रूप से जारी मूत्र का औसत भाग) 3-5 मिलीलीटर की मात्रा में बाहरी जननांग अंगों के पूरी तरह से शौचालय के बाद एक बाँझ पकवान में एकत्र किया जाता है। मूत्र के सुबह के हिस्से को लेना बेहतर होता है।

पित्तडुओडनल साउंडिंग के दौरान एकत्र किया गया उपचार कक्षएस्पिसिस के नियमों का पालन करते हुए अलग-अलग भागों ए, बी और सी में तीन बाँझ टेस्ट ट्यूबों में अलग-अलग।

पेट का पानी धो लें 20-50 मिलीलीटर की मात्रा में बाँझ जार में एकत्र किया जाता है। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि इन मामलों में गैस्ट्रिक पानी से धोना केवल उदासीन (सूक्ष्मजीवों पर बैक्टीरियोस्टेटिक या जीवाणुनाशक प्रभाव नहीं) समाधान के साथ किया जाता है - अधिमानतः उबला हुआ पानी (सोडा, पोटेशियम परमैंगनेट, आदि को जोड़ने के बिना)।

थूक. खांसने के दौरान निकलने वाले सुबह के थूक को एक बाँझ जार में एकत्र किया जाता है। खांसने से पहले, रोगी अपने दांतों को ब्रश करता है और अपने मुंह को उबले हुए पानी से धोता है ताकि यांत्रिक रूप से भोजन के मलबे, अलंकृत उपकला और मौखिक गुहा के माइक्रोफ्लोरा को हटा दिया जा सके।

ब्रोंची का फ्लशिंग पानी. ब्रोंकोस्कोपी के दौरान, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 5 मिलीलीटर से अधिक इंजेक्शन नहीं लगाया जाता है, इसके बाद एक बाँझ ट्यूब में चूषण होता है।

ग्रसनी, मौखिक गुहा और नाक का निर्वहन. मौखिक गुहा से सामग्री को खाली पेट या खाने के 2 घंटे बाद एक बाँझ कपास झाड़ू या श्लेष्म झिल्ली से एक चम्मच और लार ग्रंथियों के नलिकाओं के प्रवेश द्वार पर, जीभ की सतह पर लिया जाता है। घावों से। यदि कोई फिल्म है, तो बाद वाले को बाँझ चिमटी से हटा दिया जाता है। नाक गुहा से सामग्री एक सूखे बाँझ कपास झाड़ू के साथ ली जाती है, जिसे नाक गुहा में गहराई से डाला जाता है। नासॉफरीनक्स से सामग्री को एक बाँझ पश्च ग्रसनी कपास झाड़ू के साथ लिया जाता है, जिसे नासॉफिरिन्क्स में नाक के उद्घाटन के माध्यम से सावधानीपूर्वक डाला जाता है। यदि एक ही समय में खांसी शुरू होती है, तो खांसी समाप्त होने तक स्वाब को नहीं हटाया जाता है। डिप्थीरिया के लिए विश्लेषण करने के लिए, नाक और ग्रसनी से फिल्मों और बलगम की एक साथ जांच की जाती है, सामग्री को अलग-अलग स्वाब के साथ लिया जाता है।

सूक्ष्म पोषक तत्वों की व्यक्तिगत कॉलोनियों के विकास को प्राप्त करने के लिए विशेष तकनीकों का उपयोग करके घने पोषक मीडिया पर परीक्षण सामग्री को टीका लगाया जाता है, जिसे बाद में रोगजनक की शुद्ध संस्कृति को अलग करने के लिए निकाला जाता है।

कुछ प्रकार के जीवाणुओं को ऐच्छिक (चयनात्मक) माध्यमों का उपयोग करके पृथक किया जाता है जो विदेशी सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं या ऐसे पदार्थ होते हैं जो कुछ रोगजनक रोगाणुओं के विकास को प्रोत्साहित करते हैं।

पोषक तत्व मीडिया पर अलग-थलग पड़े सूक्ष्मजीव पहचान लो, अर्थात। उनकी प्रजातियों या प्रकार की संबद्धता का निर्धारण करें। हाल ही में, स्वास्थ्य देखभाल अभ्यास में पहचान के लिए, माइक्रोटेस्ट सिस्टम का उपयोग किया जाता है, जो कि विभेदक नैदानिक ​​वातावरण के एक सेट के साथ पैनल होते हैं, जो अध्ययन को गति देते हैं। एक तरल पोषक माध्यम में एक एंटीबायोटिक को पतला करके रोगाणुरोधी दवाओं के लिए सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता को निर्धारित करने के लिए माइक्रोटेस्ट सिस्टम का भी उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन के परिणामों का मूल्यांकन करते समय, डॉक्टर को यह ध्यान रखना चाहिए कि एक नकारात्मक परिणाम का मतलब हमेशा एक रोगज़नक़ की अनुपस्थिति नहीं होता है और यह रोगाणुरोधी दवाओं, उच्च रक्त माइक्रोसाइडल गतिविधि और तकनीकी त्रुटियों के उपयोग से जुड़ा हो सकता है। के संबंध में रोगी से सामग्री में रोगजनक सूक्ष्म जीव का पता लगाना नैदानिक ​​तस्वीरदीक्षांत, स्वस्थ या क्षणिक बैक्टीरियल कैरिज के मामले में संभव है।

रक्त से अलगाव, सभी सड़न रोकनेवाला नियमों के अधीन, सशर्त रूप से रोगजनक सूक्ष्मजीवों (स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस, एस्चेरिचिया कोलाई) और यहां तक ​​​​कि सैप्रोफाइट्स को बैक्टरेरिया की अभिव्यक्ति माना जाना चाहिए, खासकर अगर ये रोगाणु एक से अधिक सामग्री के नमूने या विभिन्न सब्सट्रेट में पाए जाते हैं ( रक्त, मूत्र), जब से शरीर की प्रतिरक्षा में कमी आती है, ये और अन्य "गैर-रोगजनक" सूक्ष्मजीव सेप्सिस सहित संक्रामक प्रक्रियाओं के प्रेरक एजेंट हो सकते हैं।

एक निश्चित कठिनाई है गैर-बाँझ मीडिया के बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणामों की व्याख्या, अर्थात् अवसरवादी सूक्ष्मजीवों की एटियलॉजिकल भूमिका का प्रमाण। इस मामले में, पृथक संस्कृतियों के प्रकार, सामग्री में किसी दिए गए प्रकार की माइक्रोबियल कोशिकाओं की संख्या, रोग के दौरान उनका बार-बार अलगाव, एक मोनोकल्चर की उपस्थिति या एक सूक्ष्मजीव के संघ जैसे संकेतकों को लिया जाता है। एक परिसर में खाता।

युशचुक एन.डी., वेंगेरोव यू.वाई.ए.

जीवाणु अनुसंधान की विधि. रक्त से रोगज़नक़ का अलगाव (हेमोकल्चर) रोगों के निदान के लिए एक प्रारंभिक विधि है। टाइफाइड-पैराटाइफाइड रोग के रोगियों में जीवाणु अंत में प्रकट होता है उद्भवनऔर बीमारी के पूरे ज्वर की अवधि के दौरान और रिलैप्स के दौरान गायब नहीं होता है। एक निश्चित सीमा तक बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के परिणाम सामग्री के संग्रह के समय और टीका लगाए गए रक्त की मात्रा पर निर्भर करते हैं। रोग की शुरुआत से पहले की रक्त संस्कृतियों का प्रदर्शन किया जाता है, रोगज़नक़ का पता लगाने की संभावना अधिक होती है। टाइफाइड बुखार के पहले सप्ताह में, रोगी के रक्त को क्यूबिटल नस से 10 मिली की मात्रा में बाद की तारीख में और रिलैप्स के दौरान - 20 मिली लिया जाता है।

अध्ययन के पहले दिनएक तरल माध्यम में रक्त को 1:10 के अनुपात में टीका लगाया जाता है। निर्दिष्ट अनुपात का कड़ाई से पालन किया जाना चाहिए, क्योंकि रक्त के एक छोटे से कमजोर पड़ने के साथ, रोगाणु इसकी जीवाणुनाशक कार्रवाई के कारण मर सकते हैं। बुवाई के लिए, वे उपयोग करते हैं: पित्त शोरबा का 10% या 20% समाधान, 50-100 मिलीलीटर की बोतलों में डाला जाता है, मांस-पेप्टोन शोरबा 1% ग्लूकोज, बाँझ आसुत जल के साथ - एनएन क्लोडनिट्स्की की विधि के अनुसार, जिसमें एरिथ्रोसाइट लसीका होता है, उनके क्षय के उत्पाद एक ही समय में बैक्टीरिया के प्रजनन के लिए एक अच्छे पोषक माध्यम के रूप में काम करते हैं। आप बाँझ नल के पानी का भी उपयोग कर सकते हैं। पित्त शोरबा पर सामग्री को टीका लगाने से सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त होते हैं। यदि मौके पर ब्लड कल्चर करना संभव नहीं है, तो सीरम को एक थक्का या साइट्रेट रक्त (10 मिलीलीटर रक्त को 5% बाँझ सोडियम साइट्रेट के 2 मिलीलीटर के साथ एक परखनली में डाला जाता है) के साथ प्रयोगशाला में भेजा जाता है। रक्त के थक्के को प्रयोगशाला में कुचल दिया जाता है और सूचीबद्ध मीडिया में से एक में टीका लगाया जाता है। शीशियों को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखा जाता है।

शोध का दूसरा दिन. अध्ययन की शुरुआत से 14-24 घंटों के बाद, सामग्री को ईओसिन और मेथिलीन ब्लू (लेविन माध्यम) के साथ एंडो के माध्यम या माध्यम पर एक पेट्री डिश में टीका लगाया जाता है। बुवाई के लिए प्लॉस्किरेव के माध्यम का उपयोग करने की अनुशंसा नहीं की जाती है, क्योंकि रक्त में टाइफाइड-पैराटाइफाइड बेसिली पोषण के प्रकार से पैराट्रॉफ़्स को बाध्य करते हैं और इस प्रकार के पोषण को तुरंत मेटाट्रॉफ़िक (अर्थात मृत कार्बनिक सब्सट्रेट) में नहीं बदलते हैं। अत: पित्त लवण युक्त इस माध्यम में टाइफाइड ज्वर बेसिली बहुत खराब रूप से विकसित होता है या बिल्कुल भी नहीं बढ़ता है। पहली बुवाई के बाद जीवाणु वृद्धि की अनुपस्थिति में, अगले 48, 72 घंटे के बाद और 5 वें और 10 वें दिन पैदा होते हैं। यदि उसी समय रोगज़नक़ को अलग नहीं किया जा सकता है, तो एक नकारात्मक उत्तर जारी किया जाता है। संदिग्ध मामलों में, समय-समय पर - 3-4 दिनों में 1 बार - सामग्री लेने के क्षण से 24 वें दिन तक फसलों का उत्पादन करने की सिफारिश की जाती है। एक नकारात्मक उत्तर अभी भी 7 वें दिन जारी किया जाता है।

शोध का तीसरा दिन. एंडो और लेविन मीडिया पर उगाई गई "संदिग्ध" कॉलोनियों (एंडो के माध्यम पर रोगजनक रोगाणुओं की कॉलोनियां रंगहीन हैं) की पहचान की जाती है, जिसके लिए 2-3 कॉलोनियों को तिरछा अगर और रेसेल के माध्यम पर उपसंस्कृत किया जाता है।

शोध का चौथा दिन. पुनर्विक्रय माध्यम पर टीकाकरण के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और दर्ज किया जाता है, पृथक संस्कृतियों के रूपात्मक गुणों का अध्ययन ग्राम-दाग वाले स्मीयर में किया जाता है। गतिशीलता निर्धारित की जाती है - फ्लैगेला की उपस्थिति या अनुपस्थिति - 4-6 घंटे की शोरबा संस्कृति से ली गई लटकती या कुचली हुई बूंद में। ऐसा करने के लिए, थोड़ा गर्म शोरबा के 1 मिलीलीटर में अगर संस्कृति (एक लूप) को टीका लगाया जाता है। चयनित संस्कृतियों (2-3 टेस्ट ट्यूब) को गिस मीडिया पर मैनिटोल, सुक्रोज और ओब्लिक एगर के साथ-साथ मांस-पेप्टोन शोरबा के साथ 2 टेस्ट ट्यूब में उपसंस्कृत किया जाता है, जिसमें फिल्टर पेपर स्ट्रिप्स को हाइड्रोजन के निर्धारण के लिए विशेष समाधान के साथ सिक्त किया जाता है। सल्फाइड और इंडोल को स्टॉपर्स के नीचे रखा जाता है (खुला "विभिन्न प्रकार की पंक्ति")।

शोध का पांचवां दिन. विस्तारित "विभिन्न प्रकार की पंक्ति" पर परिवर्तन पंजीकृत हैं। गैस निर्माण की उपस्थिति में, साल्मोनेला सेरा के मिश्रण के साथ एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है। पर सकारात्मक प्रतिक्रियाओ- और एच-सेरा के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया करें और सभी संकेतों की समग्रता के आधार पर अंतिम उत्तर जारी करें।

माइलोकल्चर का अलगाव 3-5 मिलीलीटर बाँझ गोजातीय पित्त में प्राप्त अस्थि मज्जा पंचर के टीकाकरण द्वारा या 10% पित्त शोरबा के 25-30 मिलीलीटर में किया जाता है, इसे थर्मोस्टेट में डाल दिया जाता है और अगले दिन इसे एंडो या पर फिर से लगाया जाता है। विल्सन-ब्लेयर मीडिया। भविष्य में, अनुसंधान के चरण समान हैं।

मल से बैक्टीरिया का अलगाव। बीमारी के 8वें से 10वें दिन तक, अधिक बार तीसरे सप्ताह से, टाइफाइड बुखार के रोगियों में, पैराटाइफाइड बैक्टीरिया मल के साथ बाहर निकल जाते हैं। शोध के लिए, तरल मल के अंतिम भाग को सोडियम क्लोराइड (1:10 के अनुपात में) के एक आइसोटोनिक घोल में पायसीकृत किया जाता है और बड़े कणों के जमने तक 30 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। बुवाई के लिए द्रव की सतह से सामग्री की एक बूंद ली जाती है।

अध्ययन के पहले दिन, सामग्री को संवर्धन माध्यम - पित्त शोरबा, मैग्नीशियम मीडिया, मुलर, कॉफ़मैन - पर टीका लगाया जाता है और थर्मोस्टेट में रखा जाता है। अध्ययन के दूसरे दिन, संवर्धन माध्यम से, प्लॉस्किरेव, एंडो या लेविन और विल्सन-ब्लेयर मीडिया (बिस्मथ-सल्फाइट-एगर) के साथ प्लेटों पर टीकाकरण किया जाता है। अध्ययन के बाद के चरण रक्त संस्कृति के अलगाव के समान हैं।

रोग के दूसरे से तीसरे सप्ताह तक टाइफाइड-पैराटाइफाइड समूह के जीवाणुओं को मूत्र से अलग करना सबसे अच्छा होता है। सामग्री लेने से पहले, मूत्रमार्ग के बाहरी उद्घाटन को सोडियम क्लोराइड के एक बाँझ आइसोटोनिक समाधान से धोया जाना चाहिए; महिलाओं में, कैथेटर के साथ मूत्र लेना बेहतर होता है। शोध के लिए 20-30 मिली मूत्र लें। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, तलछट को प्लॉस्किरेव के माध्यम या बिस्मथ-सल्फाइट-अगर के साथ 2 कप में टीका लगाया जाता है। सतह पर तैरनेवाला एक संवर्धन माध्यम (10% पित्त शोरबा) पर टीका लगाया जाता है और 24 घंटे के लिए थर्मोस्टैट में रखा जाता है, जिसके बाद इसे वैकल्पिक मीडिया के 2 कप में टीका लगाया जाता है। पृथक कॉलोनियों की पहचान सामान्य तरीके से की जाती है।

ग्रहणी सामग्री की जांच - पित्त। इस विधि का उपयोग अक्सर दीक्षांत समारोह के चरण में किया जाता है। बाँझ टेस्ट ट्यूब में जांच के दौरान पित्त एकत्र किया जाता है। डुओडनल सामग्री को 50 मिलीलीटर शोरबा के साथ शीशियों में टीका लगाया जाता है, और शेष सामग्री, इनोक्यूलेशन के साथ, 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। अगले दिन, घने अंतर माध्यम के साथ 2 कप में टीकाकरण किया जाता है . चयनित कॉलोनियों को वर्णित विधि द्वारा पहचाना जाता है।

टाइफाइड और पैराटाइफाइड बुखार के शुरुआती निदान में अत्यधिक संवेदनशील और आशाजनक इम्यूनोफ्लोरेसेंस की विधि है, जो रोग के पहले दिनों से रक्त की जांच करती है, 10 वें दिन से मल, 10 वें दिन ग्रहणी सामग्री सामान्य तापमानतन। टाइफाइड-पैराटाइफाइड बैक्टीरिया विशिष्ट फ्लोरोसेंट सेरा के साथ चिह्नित होते हैं, जो बाद में फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा निर्धारित किए जाते हैं। विधि अध्ययन की शुरुआत से 10-12 घंटों में रोग का निदान करने की अनुमति देती है।

टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगों का सीरोलॉजिकल निदान। रोग के दूसरे सप्ताह से, रोगियों के रक्त में विशिष्ट एंटीबॉडी दिखाई देते हैं, जिन्हें विडाल प्रतिक्रिया का उपयोग करके निर्धारित किया जा सकता है। टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड में O- और फिर H-agglutinins जमा हो जाते हैं। रोग के दौरान, कभी-कभी वी-एग्लूटीनिन का भी पता लगाया जाता है, लेकिन बाद वाले, वाहकों के विपरीत, का कोई नैदानिक ​​मूल्य नहीं होता है। टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया) के प्रेरक एजेंट के लिए विशिष्ट एग्लूटीनिन के रोगियों के रक्त में निर्धारण रोग की तीव्र अवधि में और स्वास्थ्य लाभ के दौरान निदान स्थापित करने में मदद कर सकता है।

साल्मोनेलोसिस के साथ, विडाल प्रतिक्रिया एक सहायक निदान पद्धति है। यह याद रखना चाहिए कि अक्सर हल्के प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रिया के साथ रोग के रूप होते हैं। विशेष रूप से अक्सर एग्लूटीनिन के कम टाइटर्स, उनकी अनुपस्थिति तक, एंटीबायोटिक दवाओं के साथ इलाज किए गए रोगियों में नोट किए जाते हैं।

विडाल प्रतिक्रिया के लिए, 1-3 मिलीलीटर रक्त एक उंगली या क्यूबिटल नस से एक बाँझ टेस्ट ट्यूब में लिया जाता है। रक्त के थक्के को तेज करने के लिए, इसे थर्मोस्टेट में 30 मिनट के लिए रखा जाता है। थके हुए रक्त को कांच के पिपेट से घेरा जाता है और एक स्पष्ट, व्यवस्थित सीरम दिखाई देने तक रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। थक्का का उपयोग सीडिंग (हेमोकल्चर) के लिए किया जाता है। एग्लूटीनेशन रिएक्शन को एच- और ओ-टाइफाइड, ए- और बी-पैराटाइफाइड डायग्नोस्टिकम के साथ रखा जाता है। सीरम को निम्न विधि के अनुसार 1:100 से 1:800 के अनुमापांक से शुरू करके पतला किया जाता है। एक बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 9.9 मिलीलीटर और परीक्षण सीरम के 0.1 मिलीलीटर को एक परखनली में डाला जाता है - 1:100 का पतलापन प्राप्त होता है। 4 टेस्ट ट्यूबों में (विडाल प्रतिक्रिया में प्रयुक्त एंटीजन की संख्या के अनुसार), और सीरम नियंत्रण के रूप में सेवारत एक में, पतला सीरम के 5 मिलीलीटर को 1 मिलीलीटर में डाला जाता है। शेष 5 मिलीलीटर सीरम (कमजोर पड़ने 1:100) से, 1 मिलीलीटर डाला जाता है, और 4 मिलीलीटर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान को 4 मिलीलीटर में जोड़ा जाता है और 1:200 का पतलापन प्राप्त होता है। 1:200 के तनुकरण से 4 मिली को भी 1 मिली की 4 परखनलियों में डाला जाता है, और 1:400 का तनुकरण प्राप्त करने के लिए शेष 4 मिली में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल का 4 मिलीलीटर फिर से मिलाया जाता है। बाद के कमजोर पड़ने (1:800, 1:1600) वर्णित तरीके से उत्पन्न होते हैं। 4 टेस्ट ट्यूबों में, जो नियंत्रण प्रतिजन हैं, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 1 मिलीलीटर डालें। सीरम नियंत्रण के रूप में काम करने वाले को छोड़कर, सभी प्रायोगिक टेस्ट ट्यूबों में, संबंधित डायग्नोस्टिकम की 1-2 बूंदें डाली जाती हैं। टेस्ट ट्यूब के साथ रैक को हिलाया जाता है और 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है। एच-एग्लूटिनेशन (मोटे-दानेदार) 2 घंटे के बाद होता है, ओ-एग्लूटिनेशन (सूक्ष्म-दानेदार) - बहुत बाद में। प्रतिक्रिया की तीव्रता 24 घंटों के बाद नोट की जाती है नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों की उपस्थिति में कम से कम 1:200 के कमजोर पड़ने पर विडाल प्रतिक्रिया का नैदानिक ​​​​अनुमापक।

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि यह प्रतिक्रिया अन्य बीमारियों - तपेदिक, मलेरिया, ब्रुसेलोसिस, घातक नवोप्लाज्म और कुछ स्थितियों (गर्भावस्था) में सकारात्मक हो सकती है। विडाल प्रतिक्रिया स्वस्थ व्यक्तियों (घरेलू प्रतिक्रिया) में भी सकारात्मक हो सकती है, उन लोगों में जिन्हें टीका लगाया गया है और जिन्हें अतीत में कोई बीमारी हो चुकी है (एनामेनेस्टिक प्रतिक्रिया)। विडाल प्रतिक्रिया की विशिष्टता बढ़ाने के लिए, फिशर ने सीरम को हाइपरटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान (2.9 और 5.8%) के साथ पतला करने का सुझाव दिया। यह समूह प्रतिक्रियाओं के कमजोर या उन्मूलन की ओर जाता है। बार-बार अध्ययन के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का मूल्य बढ़ जाता है, जब रोग की गतिशीलता के साथ एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि स्थापित की जाती है। पैराटाइफाइड ए के साथ, विडाल प्रतिक्रिया नकारात्मक हो सकती है या विशिष्ट एंटीबॉडी का टिटर समूह से कम हो सकता है।

हाल के वर्षों में, आंतों के रोगों के समूह को पहचानने के लिए टाइफाइड बैक्टीरिया के आंशिक एंटीजन के साथ निष्क्रिय रक्तगुल्म (RPHA) की प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। RPHA को उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ डाला गया है, यह बीमारी के 5वें दिन से सकारात्मक है। टाइफाइड बुखार, पैराटाइफाइड बुखार, साल्मोनेलोसिस के साथ ओ-एंटीजन वाले रोगियों में न्यूनतम डायग्नोस्टिक टिटर 1:200 है। एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि को निर्धारित करने के लिए प्रतिक्रिया को गतिकी में रखा जाता है।

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार में बैक्टीरियोकैरियर के प्रयोगशाला निदान के तरीके। आम तौर पर स्वीकृत तरीकों के अनुसार मल, मूत्र और ग्रहणी संबंधी सामग्री की बैक्टीरियोलॉजिकल जांच की जाती है। सेलेनाइट मीडिया का उपयोग करके सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त किए जाते हैं।

बैक्टीरिया के अलगाव की आवृत्ति के कारण, रोगज़नक़ को बोना अक्सर संभव नहीं होता है। टाइफाइड बुखार बेसिली के अधिकांश वाहकों में, वी-एंटीजन युक्त रोगाणु पाए जाते हैं, और इसलिए तीव्र और जीर्ण वाहकों के रक्त में वी-एंटीबॉडी दिखाई देते हैं (वे रोगियों के रक्त में कम आम हैं)। प्रतिक्रिया का नैदानिक ​​अनुमापांक 1:20 और उससे अधिक है। वी-एग्लूटिनेशन रिएक्शन (गर्म सीरम के साथ) के समानांतर में, विडाल रिएक्शन (देशी सीरम के साथ) एच- और ओ-टाइफाइड डायग्नोस्टिकम के साथ किया जाता है। टाइफाइड जीवाणु वाहकों के सीरा में, 60-80% मामलों में 1:200 से 1:800 के अनुमापांक में एच-एंटीबॉडी पाए जाते हैं। टाइफाइड बुखार बेसिली के वाहक की पहचान करने में एच- और वी-एंटीबॉडी के संयोजन की उपस्थिति विशेष नैदानिक ​​​​मूल्य की है।

अतिरिक्त शोध विधियों में, टाइफिन के साथ एक त्वचा-एलर्जी परीक्षण, साथ ही वी एंटीजन के साथ आरपीएचए का उपयोग टाइफाइड बेसिली की गाड़ी की पहचान के लिए किया जाता है।

इस प्रकार, टाइफाइड-पैराटायफायड रोगों के खिलाफ लड़ाई की सफलता के लिए एक महत्वपूर्ण शर्त संक्रमण के स्रोत की प्रारंभिक और पूर्ण पहचान और निष्प्रभावी है। वर्तमान में, टाइफाइड बुखार छिटपुट रूप से होता है। इसी समय, रोग का कोर्स कम लंबा होता है और शास्त्रीय रूप के सभी लक्षणों के साथ नहीं होता है, जिससे नैदानिक ​​​​पहचान मुश्किल हो जाती है।

उपरोक्त के संबंध में, एक व्यापक प्रयोगशाला परीक्षा का बहुत महत्व है।

बैक्टीरियोलॉजिकल रिसर्च मेथड (बीएलएमआई)- पोषक मीडिया पर खेती द्वारा बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों के अलगाव और सूक्ष्मजीवों की रूपात्मक, सांस्कृतिक, जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक, पारिस्थितिक विशेषताओं के अध्ययन के आधार पर प्रजातियों के लिए उनकी पहचान पर आधारित एक विधि।

स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा अनुमोदित मानक नैदानिक ​​​​योजनाओं का उपयोग करके संक्रमण का बैक्टीरियोलॉजिकल निदान किया जाता है।

शुद्ध संस्कृति -एक ही प्रजाति के जीवाणु, पोषक माध्यम पर उगाए जाते हैं, जिनके गुणों का अध्ययन किया जा रहा है।

तनाव- एक विशिष्ट समय पर एक विशिष्ट स्रोत से पृथक एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों की पहचान की गई शुद्ध संस्कृति। एक ही प्रजाति के उपभेद जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल, जैविक और अन्य गुणों के साथ-साथ अलगाव के स्थान और समय में बहुत भिन्न हो सकते हैं।

बीएलएमआई के लक्ष्य:

1. एटियलॉजिकल निदान: सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति का अलगाव और इसकी पहचान।

2. अतिरिक्त गुणों का निर्धारण, उदाहरण के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं और बैक्टीरियोफेज के लिए सूक्ष्मजीव की संवेदनशीलता।

3. सूक्ष्मजीवों की संख्या का निर्धारण (यूपीएम के कारण होने वाले संक्रमणों के निदान में महत्वपूर्ण)।

4. सूक्ष्मजीवों की टाइपिंग, यानी अध्ययन के आधार पर अंतर-विशिष्ट अंतरों का निर्धारण जेनेटिकऔर महामारी विज्ञान(फागोवर और सेरोवर) मार्करइसका उपयोग महामारी विज्ञान के उद्देश्यों के लिए किया जाता है, क्योंकि यह आपको विभिन्न अस्पतालों, भौगोलिक क्षेत्रों में विभिन्न रोगियों और बाहरी वातावरण की विभिन्न वस्तुओं से पृथक सूक्ष्मजीवों की समानता स्थापित करने की अनुमति देता है।

BLMI में कई चरण शामिल हैं,ऐरोबेस, ऐच्छिक अवायवीय तथा बाध्यकारी अवायवीय जीवों के लिए भिन्न।

I. एरोबिक्स और वैकल्पिक अवायवीय जीवों की शुद्ध संस्कृति के अलगाव में BLMI के चरण।

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ए संग्रह, परिवहन, भंडारण, प्रारंभिक प्रसंस्करणसामग्री।कभी-कभी, बुवाई से पहले, पृथक सूक्ष्मजीव के गुणों को ध्यान में रखते हुए, सामग्री का चयनात्मक प्रसंस्करण किया जाता है। उदाहरण के लिए, एसिड प्रतिरोधी माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस की उपस्थिति के लिए थूक या अन्य सामग्री की जांच करने से पहले, सामग्री को एसिड या क्षार समाधान के साथ इलाज किया जाता है।

बी. संवर्धन माध्यम में सीडिंग(यदि आवश्यक हो) यह तब किया जाता है जब परीक्षण सामग्री में बैक्टीरिया की एक छोटी मात्रा होती है, उदाहरण के लिए, रक्त संस्कृति को अलग करते समय। ऐसा करने के लिए, बड़ी मात्रा में बुखार की ऊंचाई पर लिया गया रक्त (वयस्कों में 8-10 मिलीलीटर, बच्चों में 4-5 मिलीलीटर) को 1:10 के अनुपात में माध्यम में टीका लगाया जाता है (रक्त जीवाणुनाशक की क्रिया को दूर करने के लिए) कारक); बुवाई 18-24 घंटों के लिए 37 0 C के तापमान पर की जाती है।

बी परीक्षण सामग्री की माइक्रोस्कोपी।परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसे ग्राम या अन्य विधि से दाग दिया जाता है और सूक्ष्मदर्शी किया जाता है। वर्तमान माइक्रोफ्लोरा, इसकी मात्रा का आकलन करें। आगे के शोध के दौरान प्राथमिक स्मीयर में मौजूद सूक्ष्मजीवों को अलग किया जाना चाहिए।

छ. पृथक कालोनियों को प्राप्त करने के लिए पोषक माध्यमों पर बुवाई।पृथक कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए सामग्री को एक अलग डायग्नोस्टिक या चयनात्मक माध्यम के साथ एक प्लेट पर यांत्रिक पृथक्करण द्वारा लूप या स्पैटुला के साथ टीका लगाया जाता है। बुवाई के बाद, पकवान को उल्टा कर दिया जाता है (संक्षेपण तरल की बूंदों के साथ कालोनियों को धब्बा से बचने के लिए), हस्ताक्षरित और थर्मोस्टेट में 37 0 सी के तापमान पर 18-24 घंटों के लिए रखा जाता है।

यह याद रखना चाहिए कि सूक्ष्मजैविक संस्कृतियों की बुवाई और पुनर्रोपण करते समय, कार्यकर्ता का ध्यान पोषक माध्यमों के संदूषण को रोकने और दूसरों के संक्रमण और आत्म-संक्रमण को रोकने के लिए सड़न रोकनेवाला नियमों के अनुपालन की ओर आकर्षित किया जाना चाहिए!

अवसरवादी सूक्ष्मजीवों के कारण संक्रमण के मामले में, जहां रोग संबंधी सामग्री में मौजूद सूक्ष्मजीवों की संख्या मायने रखती है, सामग्री का एक मात्रात्मक टीकाकरण किया जाता है, जिसके लिए सामग्री के 100 गुना कमजोर पड़ने (आमतौर पर 3 कमजोर पड़ने) की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। टेस्ट ट्यूब में एक बाँझ आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में। उसके बाद, पेट्री डिश में पोषक तत्व मीडिया पर प्रत्येक कमजोर पड़ने के 50 μl बोया जाता है।

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A. मीडिया पर कॉलोनी के आकारिकी का अध्ययन, उनकी माइक्रोस्कोपी।वे व्यंजनों को देखते हैं और इष्टतम पोषक माध्यम, विकास दर और सूक्ष्मजीवों के विकास की प्रकृति को नोट करते हैं। अध्ययन के लिए चुनें केंद्र के करीब, स्ट्रोक के साथ स्थित पृथक कॉलोनियां।यदि कई प्रकार की कॉलोनियां बढ़ती हैं, तो प्रत्येक की अलग से जांच की जाती है। कालोनियों के संकेतों का आकलन करें (तालिका। 7)। यदि आवश्यक हो, फसलों के साथ प्लेटों को एक आवर्धक कांच के माध्यम से या कम आवर्धन लेंस और एक संकुचित छिद्र वाले सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करके देखा जाता है। वे उपनिवेशों के विभिन्न स्वरूपों के टिंकटोरियल गुणों का अध्ययन करते हैं, इसके लिए अध्ययनाधीन कालोनी का एक भाग तैयार किया जाता है। धब्बा,ग्राम या अन्य विधियों से सना हुआ, सूक्ष्म रूप से और संस्कृति की शुद्धता की आकृति विज्ञान का निर्धारण। यदि आवश्यक हो, तो डालें कांच पर सांकेतिक आरएपॉलीवलेंट सीरम के साथ।

बी शुद्ध संस्कृति का संचय।एक शुद्ध संस्कृति को संचित करने के लिए, सभी आकारिकी की अलग-अलग कॉलोनियों को तिरछी अगर या किसी अन्य पोषक माध्यम के साथ अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में उपसंस्कृत किया जाता है और थर्मोस्टेट में +37 0 C पर ऊष्मायन किया जाता है (यह तापमान अधिकांश सूक्ष्मजीवों के लिए इष्टतम है, लेकिन यह अलग हो सकता है, उदाहरण के लिए, के लिए कैम्पिलोबैक्टीरियम एसपीपी।- +42 0 सी, कैंडिडा एसपीपी। और यर्सिनिया पेस्टिस- +25 0 सी)।

क्लिगलर का माध्यम आमतौर पर एंटरोबैक्टीरिया के संचय माध्यम के रूप में उपयोग किया जाता है।

क्लिगलर माध्यम की संरचना:एमपीए, 0.1% ग्लूकोज, 1% लैक्टोज, हाइड्रोजन सल्फाइड अभिकर्मक (आयरन सल्फेट + सोडियम थायोसल्फेट + सोडियम सल्फाइट), फिनोल रेड इंडिकेटर। माध्यम का प्रारंभिक रंग रास्पबेरी-लाल है, माध्यम टेस्ट ट्यूबों में "तिरछा" है: इसमें एक कॉलम (2/3) और एक बेवल सतह (1/3) है।

Kligler के माध्यम में बुवाई सतह पर एक स्ट्रोक और एक स्तंभ में एक इंजेक्शन द्वारा की जाती है।

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ए. संचय माध्यम पर विकास के लिए लेखांकन, संस्कृति की शुद्धता का आकलनएक ग्राम स्मीयर में। विकास पैटर्नपृथक शुद्ध संस्कृति। दृष्टि से स्वच्छ संस्कृति एक समान वृद्धि की विशेषता है। पर सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणइस तरह की संस्कृति से तैयार एक सना हुआ धब्बा, रूपात्मक और टिंकटोरियल रूप से सजातीय कोशिकाएं विभिन्न क्षेत्रों में देखने में पाई जाती हैं। हालांकि, कुछ प्रकार के जीवाणुओं में निहित स्पष्ट फुफ्फुसीयता के मामले में, शुद्ध संस्कृति से स्मीयर में विभिन्न आकारिकी वाली कोशिकाएं एक साथ हो सकती हैं।

यदि Kligler संकेतक माध्यम का उपयोग संचय माध्यम के रूप में किया गया था, तो कॉलम और बेवल वाले भाग में इसके रंग में परिवर्तन का मूल्यांकन किया जाता है, जिसके अनुसार जैव रासायनिक गुण निर्धारित किए जाते हैं: ग्लूकोज का किण्वन, लैक्टोज और हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन। जब लैक्टोज विघटित होता है, तो माध्यम का ढलान वाला हिस्सा पीला हो जाता है, जब ग्लूकोज विघटित हो जाता है, तो स्तंभ पीला हो जाता है। शर्करा के अपघटन के दौरान CO2 के निर्माण के साथ, गैस के बुलबुले या स्तंभ में एक विराम बनता है। हाइड्रोजन सल्फाइड उत्पादन के मामले में, फेरस सल्फेट को फेरस सल्फाइड में बदलने के कारण इंजेक्शन के साथ कालापन देखा जाता है।

Kligler माध्यम (चित्र 23) के रंग में परिवर्तन की प्रकृति को सूक्ष्मजीवों द्वारा नाइट्रोजनयुक्त पदार्थों के टूटने की असमान तीव्रता और एरोबिक (ढलान सतह पर) और अवायवीय (एक में) के तहत क्षारीय उत्पादों के गठन द्वारा समझाया गया है। कॉलम) शर्तें।

एरोबिक स्थितियों के तहत, एक मध्यम स्तंभ की तुलना में ढलान वाली सतह पर अधिक तीव्र क्षार निर्माण होता है। इसलिए, माध्यम में मौजूद ग्लूकोज के कम मात्रा में अपघटन के दौरान, बेवल वाली सतह पर बनने वाला एसिड जल्दी से बेअसर हो जाता है। वहीं, लैक्टोज के अपघटन के दौरान, जो उच्च सांद्रता में एक माध्यम में मौजूद होता है, क्षारीय उत्पाद एसिड को बेअसर करने में सक्षम नहीं होते हैं।

स्तंभ में अवायवीय स्थितियों के तहत, क्षारीय उत्पाद नगण्य मात्रा में बनते हैं, इसलिए यहां ग्लूकोज किण्वन का पता लगाया जाता है।

चावल। 23.क्लिगलर संकेतक माध्यम:

1 - प्रारंभिक,

2 - वृद्धि के साथ ई कोलाई

3- वृद्धि के साथ एस. पैराटाइफी बी,

4 - वृद्धि के साथ एस टाइफीस

ई कोलाईगैस बनाने के साथ ग्लूकोज और लैक्टोज को विघटित करें, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन न करें। वे मीडिया ब्रेक के साथ कॉलम और बेवल वाले हिस्से के पीलेपन का कारण बनते हैं।

एस. पैराटाइफीगैस के निर्माण के साथ ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक। वे टूटने के साथ स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं, बेवल वाला हिस्सा रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है। जिसमें एस. पैराटाइफी बीहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन (इंजेक्शन के दौरान एक काला रंग दिखाई देता है), एस. पैराटाइफी एहाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं होता है।

एस टाइफीसगैस बनने के बिना ग्लूकोज को विघटित करें, लैक्टोज-नकारात्मक, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करें। वे स्तंभ को बिना विराम के पीला कर देते हैं, बेवल वाला भाग रंग नहीं बदलता है और रास्पबेरी रहता है, इंजेक्शन के दौरान काला रंग दिखाई देता है।

शिगेला एसपीपी।ग्लूकोज-पॉजिटिव, लैक्टोज-नेगेटिव, हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन नहीं करते हैं। वे स्तंभ के पीलेपन का कारण बनते हैं (सेरोवर के आधार पर या बिना विराम के), बेवल वाला भाग रंग नहीं बदलता है और लाल रंग का रहता है।

बी शुद्ध संस्कृति की अंतिम पहचान(प्रजातियों या प्रकार के स्तर तक पृथक सूक्ष्मजीव की व्यवस्थित स्थिति का निर्धारण) और एंटीबायोटिक दवाओं के लिए पृथक संस्कृति के संवेदनशीलता स्पेक्ट्रम का निर्धारण।

इस स्तर पर एक शुद्ध संस्कृति की पहचान करने के लिए जैव रासायनिक, आनुवंशिक, सीरोलॉजिकल और जैविक विशेषताओं का अध्ययन किया जाता है (तालिका 8)।

नियमित प्रयोगशाला अभ्यास में, पहचान के दौरान सभी गुणों का अध्ययन करने की आवश्यकता नहीं होती है। सूचनात्मक, सुलभ, सरल परीक्षणों का उपयोग किया जाता है, जो पृथक सूक्ष्मजीव की प्रजातियों (संस्करण) संबद्धता को निर्धारित करने के लिए पर्याप्त है।